醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學題庫下載題庫

在分子檢驗中，設計適當的引子（primer）對於核酸擴增反應的特異性非常重要。不良的引子設計可能導致偽陽性結果或擴增效率低下。以下針對每個選項逐一分析。

選項解析：

(A) 引子的GC含量應控制在30～70%間

• 正確。

• 引子的 GC 含量會影響退火（annealing）溫度與穩定性。過高或過低的 GC 含量都會降低引子的效率。30～70% 被認為是最佳範圍。

(B) 應該避免形成引子雙體（primer-dimer）

• 正確。

• 引子雙體的形成會耗盡 PCR 反應中的試劑，導致擴增效率下降並產生偽陽性結果。因此，引子設計時要避免 3’ 端互補，避免形成雙體。

(C) 為提高特異性，primers最好出現連續4個G

• 錯誤。

• 引子中連續4個或更多的G會導致非特異性結構（如G-quadruplex），影響擴增效率。這不會提高特異性，反而可能導致偽陽性。

(D) real time PCR的放大片段不要超過400bp

• 正確。

• 在 real-time PCR 中，片段長度應該保持在 100-400bp 之間，以提高擴增效率和檢測靈敏度。片段太長會降低擴增效率。

總結：

設計引子時要考量 GC 含量、避免形成雙體、控制片段長度等，但連續多個 G 不會提高特異性，反而會影響擴增的準確性和效率。

正確答案：C. 為提高特異性，primers最好出現連續4個G