42. 蛋白質經常需要兩種以上參與執行同一功能，哪一種技術無法測定蛋白質-蛋白質相互作 用？
(A) 免疫共沉澱
(B) 酵母雙雜交
(C) 螢光共振能量轉移
(D) 次世代定序

GPT說的，參考參考
(A) 免疫共沉澱 (Immunoprecipitation, IP)

描述： 免疫共沉澱是一種利用抗體來從混合物中選擇性分離目標蛋白質及其相互作用分子的技術。

步驟：

1. 抗體結合：將特異性抗體加入樣品中，抗體會與目標蛋白質特異性結合。
2. 抗體-蛋白質複合物分離：利用蛋白A/G珠或磁珠等固相支撐物捕捉抗體-蛋白質複合物。
3. 洗滌：洗去非特異性結合的蛋白質和雜質，保留抗體-蛋白質複合物。
4. 解析：將抗體-蛋白質複合物從固相支撐物上解析，釋放出目標蛋白質及其結合蛋白。
5. 分析：使用 SDS-PAGE 和 Western blot 分析捕獲的蛋白質。

應用：

• 研究蛋白質-蛋白質相互作用。
• 檢測特定蛋白質的存在和量。

(B) 酵母雙雜交 (Yeast Two-Hybrid, Y2H)

描述： 酵母雙雜交是一種在酵母細胞中研究蛋白質-蛋白質相互作用的技術。

步驟：

1. 構建融合蛋白：將兩個感興趣的蛋白質（蛋白A和蛋白B）分別與 DNA 結合域（DBD）和激活域（AD）融合。
2. 轉化酵母細胞：將融合蛋白的基因轉入酵母細胞。
3. 相互作用檢測：如果蛋白A和蛋白B相互作用，DBD和AD會靠近，重新激活報告基因（如 lacZ 或 HIS3），從而能夠檢測到相互作用。
4. 篩選：通過篩選含有報告基因激活的酵母菌落，識別相互作用的蛋白質對。

應用：

• 鑑定新的蛋白質-蛋白質相互作用。
• 繪製蛋白質相互作用網絡。

(C) 螢光共振能量轉移 (Förster Resonance Energy Transfer, FRET)

描述： FRET 是一種測量兩個螢光標記分子之間距離的技術，適合研究分子間相互作用和構象變化。

步驟：

1. 標記分子：將兩個感興趣的分子分別標記上供體螢光染料和受體螢光染料。
2. 激發供體：用特定波長的光激發供體螢光染料。
3. 能量轉移：如果供體和受體之間的距離足夠近（通常小於10納米），供體的能量會轉移給受體，導致受體發出螢光。
4. 檢測螢光：測量受體發出的螢光強度和供體螢光的衰減，以計算兩分子之間的距離。

應用：

• 研究蛋白質折疊和構象變化。
• 測量細胞內分子間的相互作用和距離變化。