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54.PCR 是分子檢驗常用的核酸放大技術，關於延伸技術的敘述，下列何者最正確？
(A)nested PCR 可提高 PCR 反應的 specificity 和sensitivity
(B)進行 semi-nested PCR 時，反應中一共有4個primers
(C)PCR 之 tailed primer method，可增加PCR的specificity，但不會增加sensitivity
(D)gap-PCR 適合用來偵測核酸點突變
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統計： A(1264), B(125), C(167), D(280), E(0) #3064579
統計： A(1264), B(125), C(167), D(280), E(0) #3064579
詳解 (共 3 筆)
迪士尼城堡
#7282987
（A）nested PCR 可提高 PCR 反應的 specificity 和 sensitivity ✅
Nested PCR 分兩輪：
第一輪：外側 primers 擴增較大區段
第二輪：內側（nested）primers 以第一輪產物為模板再擴增
可大幅降低非特異性擴增 → ↑ specificity；對低拷貝目標更容易偵測 → ↑ sensitivity
（B）進行 semi-nested PCR 時，反應中一共有 4 個 primers ❌
Semi-nested PCR：
第一輪：2 個 primers
第二輪：1 個沿用舊 primer + 1 個新的內側 primer
總共只涉及 3 種 primers，不是 4 個
第一輪：外側 primers 擴增較大區段
第二輪：內側（nested）primers 以第一輪產物為模板再擴增
可大幅降低非特異性擴增 → ↑ specificity；對低拷貝目標更容易偵測 → ↑ sensitivity
（B）進行 semi-nested PCR 時，反應中一共有 4 個 primers ❌
Semi-nested PCR：
第一輪：2 個 primers
第二輪：1 個沿用舊 primer + 1 個新的內側 primer
總共只涉及 3 種 primers，不是 4 個
（C）tailed primer method 可增加 specificity，但不會增加 sensitivity ❌
Tailed primers 是在 primer 5′ 端加上「非互補序列」（如 adaptor、barcode）
主要用途：sequencing；cloning；multiplex PCR
本身不會直接提升 PCR specificity 或 sensitivity
（D）gap-PCR 適合用來偵測核酸點突變 ❌
Gap-PCR 是用來偵測大片段缺失（deletion）
例如：α-thalassemia 的基因缺失
不適合偵測點突變（point mutation）
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