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在琥珀醯輔酶A（succinyl Co-A）形成後，便要開始進行下一個步驟：琥珀酸（succinate）的形成，以下是細部反應：
a. succinyl Co-A在琥珀酸輔酶A合成酶（又稱succinyl-CoA synthetase、succinate thiokinase 或 succinate-CoA ligase，為連接酶的一種）的催化下，進行succinyl Co-A→succinate的可逆反應，放出能量
b. 因thiokinase （即succinyl-CoA synthetase）酵素作用時，會有利於核苷二磷酸分子（如：ADP、GDP）轉變為核苷三磷酸（如：ATP、GTP），故在此GDP吸收能量轉變為GTP