家兔熱原試驗

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建立於 2026年10月25日

學習重點 熱原主要來自革蘭氏陰性菌外膜的脂多醣（LPS，內毒素）；滅菌與去除熱原是不同概念。 熱原試驗使用健康成年家兔，檢品預溫至37±2℃，由耳靜脈注射，每公斤體重以10 mL為限，須於10分鐘內注射完畢，並測量肛溫。 先使用3隻家兔；均未升溫達0.5℃即合格。任一隻達到門檻，須追加5隻，合併8隻判定。 家兔可以重複使用：無熱原反應者須休養兩天；有熱原反應者須休養兩星期。 依中華藥典第七版，注射劑昇血壓物質檢驗使用狗，與熱原試驗使用家兔不同。 核心觀念 一、熱原的來源、試驗目的與器具處理 熱原（pyrogens）是能引起發熱反應的物質，主要來源為革蘭氏陰性菌外膜的脂多醣，也就是細菌內毒素。應掌握「主要來源」的說法，不宜將所有熱原都直接等同於細菌內毒素。 熱原試驗藉由觀察家兔注射檢品後的體溫上升程度，評估藥品引起發熱反應的可能性，使其符合規定限度。考試所稱「無熱原」，是指符合試驗判定標準，不是證明檢品中絕對不存在任何熱原分子。 熱原具有耐熱性，滅菌不等於去除熱原。耐熱的注射器、針頭及玻璃器皿等，可採250℃乾熱30分鐘處理以去除熱原。器具若受到熱原污染，可能影響檢品的試驗結果。 二、家兔熱原試驗的操作 項目應掌握的規定 試驗動物健康成年家兔 檢品溫度配製後、注射前預先加溫至37±2℃ 注射部位耳靜脈 注射用量上限每公斤體重10 mL 注射時間不得超過10分鐘 測溫方式由肛門插入溫度計或感應器，測量直腸溫度（肛溫） 注射後記錄於1～3小時間，每隔30分鐘記錄體溫 用量應分清楚「上限」與「固定劑量」：每公斤10 mL是注射用量的限制，不能改寫成每公斤固定使用1 mL或5 mL，也不能把上限寫成20 mL。 每隻家兔的體溫上升度數，以注射後記錄的最高體溫減去注射前的對照體溫計算。若體溫下降，上升度數以0計，不得以負數抵銷其他家兔的升溫。 三、第一階段：3隻家兔的判定 第一階段使用3隻家兔。若沒有任何一隻體溫上升達到或超過0.5℃，即符合無熱原的判定標準，可判定合格。 只要有任一隻體溫上升達0.5℃或以上，便須再取5隻進行第二階段，不能僅憑第一階段出現升溫反應，就直接判定整批不合格。 判讀關鍵在於「達到或超過」：剛好上升0.5℃也算達到門檻；必須每隻都低於0.5℃，才能在第一階段直接通過。第一階段也不是以3隻的平均升溫決定是否合格。 四、第二階段：合併8隻，同時檢查兩個條件 第二階段追加5隻後，須將原先3隻與新增5隻合併判定。以下兩項條件必須同時成立，才可判定合格： 8隻中，體溫上升達0.5℃或以上者不超過3隻。 8隻體溫上升度數的總和不超過3.3℃。 因此，達門檻者有4隻以上，或總升溫超過3.3℃，任一條件成立即不合格。「不超過」包含等於，因此達門檻者剛好3隻、總和剛好3.3℃，仍未超出各自限度，但另一項條件也必須符合。 判讀情況結論 第一階段每隻升溫均低於0.5℃合格，無須追加試驗 第一階段任一隻升溫達0.5℃追加5隻，尚不能作最終判定 8隻總升溫符合限度，但有4隻達0.5℃不合格，因反應隻數超限 8隻反應隻數符合限度，但總升溫超過3.3℃不合格，因總升溫超限 作答時先看目前共有幾隻，再檢查反應隻數及升溫總和。不可只看總和，也不可只看新增5隻而忽略原先3隻。 五、試驗動物的休養與再使用 先前熱原試驗的反應再次使用前的休養時間 無熱原反應至少兩天（48小時） 有熱原反應至少兩星期 家兔經適當休養後可以再次供試驗使用。應依該動物先前是否出現熱原反應區分休養時間；不能認為沒有反應就可立即再用，也不能認為曾有反應就永久不得使用。 六、注射劑不同檢驗的動物 依中華藥典第七版，熱原試驗使用家兔，昇血壓物質檢驗使用狗。兩者檢驗目的不同，不能因為同屬注射劑檢驗，就套用相同的試驗動物。 常考陷阱 把用量上限改成1 mL/kg：即使同一句中的「耳靜脈」與「10分鐘內」都正確，整句仍因用量錯誤而不成立。正確上限為10 mL/kg。 把注射時間寫成20分鐘：正確為不超過10分鐘；體溫記錄則是注射後1～3小時、每30分鐘一次，不是1～5小時。 把0.5℃寫成必須「超過」才算：剛好0.5℃就已達門檻，不能當作低於門檻。 第一階段有反應便判不合格：應追加5隻，不是再取3隻，也不是直接結束試驗。 8隻只檢查升溫總和：即使總和低於3.3℃，若達0.5℃者超過3隻，仍不合格。 用體溫下降抵銷升溫：下降以0計，不能以負值加入總和。 無反應只休息一天：應休養兩天；有反應則休養兩星期。「只能使用一次」及「有反應就不能再用」均錯。 混淆途徑、測溫與動物：熱原試驗是耳靜脈注射、測肛溫；昇血壓物質檢驗的動物則選狗。 記憶口訣 「耳靜十毫十分鐘，三兔有反應再加五。」耳靜脈注射，每公斤以10 mL為限，10分鐘內完成；先3隻，任一隻升溫達0.5℃就追加5隻。 「八兔雙關卡：反應最多三，總和三點三。」達0.5℃者不超過3隻，且升溫總和不超過3.3℃，兩項都要符合。 「無反應兩天，有反應兩週；熱原兔，昇壓狗。」