學習重點 先分辨抗凝機轉:EDTA、檸檬酸鹽與草酸鹽都藉由降低可用鈣離子而抗凝;肝素則增強抗凝血酶Ⅲ作用,與螯合鈣最不相關。 依檢驗項目選管:血鉀選鋰肝素、血鎂與鹼性磷酸酶可選肝素血漿;血鈣在所列常見採血管中選不含抗凝劑者;脂質檢驗以EDTA為重要考點。 肝素並非所有檢驗都適用:可能干擾免疫分析,也會抑制PCR反應,因此PCR檢體通常避免使用肝素。 血清與血漿有成分差異:血漿保留纖維蛋白原,總蛋白質通常較高;血清鉀通常較高。膽紅素則通常可使用血清或適合的血漿測定。 肝素是高分子多醣:屬高度硫酸化的醣胺聚醣,含艾杜糖醛酸、羧基與硫酸基,分子量約數千至數萬Da。 核心觀念 一、抗凝劑如何阻止凝血 添加物主要作用選管重點 EDTA螯合鈣、鎂等金屬離子,使凝血所需的鈣無法參與反應。適合血球分析,也常用於脂質及核酸檢驗;不適合血鈣、血鎂及鹼性磷酸酶測定。 肝素增強抗凝血酶Ⅲ對凝血酶及活化凝血因子的抑制作用。常用於生化檢驗;血鉀選鋰肝素,PCR則避免使用。 檸檬酸鹽與鈣形成複合物,降低可用鈣離子。常用於凝血試驗;一般血液與檸檬酸鈉溶液的體積比為9:1。 草酸鹽與鈣形成難溶的草酸鈣,使鈣沉澱。不適合測鈣;可與氟化鈉合用於葡萄糖採血管。 氟化鈉主要抑制烯醇化酶,減少糖解;氟離子也可藉結合鈣產生抗凝作用。主要考點為保存葡萄糖,實務上常與其他抗凝成分合用。 EDTA與檸檬酸鹽是結合鈣,草酸鹽是使鈣沉澱,肝素則走抗凝血酶途徑。三種涉及鈣的抗凝劑,不能與肝素視為相同機轉。氟化鈉的相關作用來自氟離子,不能寫成鈉離子形成氟化鈣。 二、肝素的抗凝方向與化學結構 抗凝血酶Ⅲ又稱抗凝血酶,可使凝血酶失去活性。肝素與其結合後,會大幅加速其抑制凝血酶(因子Ⅱa)及因子Xa等活化凝血因子的作用,進而減少凝血酶生成及纖維蛋白形成。 凝血酶原是凝血酶的前驅物;凝血酶可將纖維蛋白原切割為纖維蛋白。看到「抑制凝血酶原轉變及凝血酶作用」的概括敘述,應聯想到肝素;更精確的機轉是透過抗凝血酶抑制活化凝血因子。肝素阻止纖維蛋白原轉為纖維蛋白,絕非促進此轉變。 肝素是由重複醣類單位構成的高度硫酸化醣胺聚醣,含胺基糖、艾杜糖醛酸,也可含葡萄糖醛酸。結構具有硫酸基及醣醛酸的羧基,在生理條件下帶大量負電荷。其分子長度不一,分子量約數千至數萬Da,不能記成約500Da的小分子。 三、依檢驗項目選擇檢體 血鉀:選鋰肝素血漿,適用於ISE等測定。鉀EDTA會直接帶入鉀,造成假性升高;即使知道添加量,也不應把它當作常規血鉀檢體。 血鎂:在肝素、EDTA、檸檬酸鹽及草酸鹽之間,選肝素。EDTA等添加物可能結合金屬離子或干擾測定。 血鈣:在EDTA、檸檬酸鈉、草酸鉀加氟化鈉,以及無抗凝劑採血管之間,選無抗凝劑採血管取得血清。若專門測定游離鈣,則須依方法使用適當的平衡肝素採血裝置,不宜把所有鈣檢驗一概視為只能用血清。 鹼性磷酸酶(ALP):若使用抗凝血漿,在常列選項中選肝素。ALP活性需要金屬離子參與,EDTA等會干擾其測定。CK反應也需要鎂,不能將EDTA概括列為ALP、CK的通用抗凝劑。 脂質:比較常見抗凝劑時,以EDTA為本單元的重要選擇。不可用「肝素會造成體外脂血症」作為理由;體內給予肝素所引起的脂蛋白脂酶釋放,與採血管中的肝素添加物應分開理解。 葡萄糖:含氟化鈉的採血管可減少糖解造成的葡萄糖下降,但抑制作用並非立即完全發生,仍須及時處理檢體。 PCR:肝素可能抑制聚合酶反應,造成擴增失敗或結果偏差,通常選用方法允許的EDTA檢體。 免疫分析:肝素可能影響部分抗原抗體反應或分析系統;是否受影響及偏差方向依方法而異,不能認為所有免疫分析都可任意使用肝素血漿。 四、血清與血漿的比較 比較項目血清血漿 取得方式血液凝固後離心分離。血液加入抗凝劑後離心分離。 纖維蛋白原凝固時已轉為纖維蛋白,通常不再保留。保留纖維蛋白原。 總蛋白質通常略低。通常略高,主要與保留纖維蛋白原有關。 鉀通常略高,與凝固時血小板等釋放鉀有關。通常較低,但仍須避免溶血。 膽紅素通常可供測定。使用方法允許的抗凝劑時,通常與血清無明顯差異。 急診檢驗須等待血液凝固。不必等待凝固,較適合快速處理。 血清與血漿的磷可能因凝固、細胞釋出成分及分離時間而有差異;在總蛋白質、膽紅素、磷與鉀的比較中,膽紅素是通常不因選用血清或適當血漿而明顯改變的項目。 血清在一般教科書比較中通常較澄清、干擾較少,但仍可能發生溶血、脂血或凝固不完全。做血清蛋白質電泳時,宜使用不含抗凝劑採血管,因為血漿中的纖維蛋白原可能形成額外條帶,干擾判讀。 常考陷阱 「肝素靠螯合鈣抗凝」:錯。關鍵是增強抗凝血酶作用。 「肝素促進纖維蛋白原形成纖維蛋白」:方向相反,肝素抑制此過程。 「鉀EDTA可以用來測血鉀」:添加物本身含鉀,會使結果失真,應選鋰肝素。 「EDTA適用於血鈣、血鎂及ALP」:EDTA會螯合金屬離子,既干擾離子測定,也會降低部分酵素活性。 「肝素是PCR最佳抗凝劑」:肝素可能抑制PCR,不能因它適合多項生化檢驗就全面套用。 「氟化鈉完全沒有抗凝功能」:過於絕對;其主要用途是抑制糖解,採血管常另配合其他抗凝成分。 「凝血試驗以六倍血液混合檸檬酸鈉」:一般凝血採血管應維持血液:抗凝劑為9:1,並依標示採足血量。 「血清鉀較低、總蛋白較高」:兩者都顛倒。血清鉀通常較高,總蛋白質通常較低。 「肝素約500Da」:錯。肝素是含硫酸基、羧基及艾杜糖醛酸的高分子多醣。 記憶口訣 「EDTA抓金屬,草酸沉鈣,肝素助抗凝;鉀選鋰肝素,脂質選EDTA,PCR避肝素。」 「血漿蛋白高,血清鉀稍高;膽紅素差異少,電泳血清好。」