學習重點 掌握 pH 8.6 鹼性電泳的極性:陽極為正極,陰極為負極;多數血清蛋白帶負電,主要朝陽極遷移。 熟記由陽極至陰極的相對位置:前白蛋白、白蛋白、α1、α2、β、γ。前白蛋白比白蛋白更靠近陽極;正常電泳圖最大峰則是白蛋白。 建立區帶與成分的對應:α1 以抗胰蛋白酶為主,α2 含結合蛋白與藍胞漿素,β 含運鐵蛋白、C3 與 LDL,γ 主要為抗體。 理解體內溶血會消耗結合蛋白,使 α2 區可能下降;血漿中的纖維蛋白原則可能形成額外區帶。 能以總蛋白濃度 × 區帶面積 ÷ 總面積計算各區帶的蛋白濃度。 核心觀念 一、電泳方向與區帶排序 血清蛋白常以醋酸纖維素膜或瓊脂凝膠,在 pH 8.6 的鹼性緩衝液中分離。多數血清蛋白在此條件下帶淨負電,因此具有向陽極(正極)移動的電泳趨勢。 由陽極端往陰極端,常見相對位置為:前白蛋白 → 白蛋白 → α1-球蛋白 → α2-球蛋白 → β-球蛋白 → γ-球蛋白。一般血清蛋白電泳主要報告白蛋白及四類球蛋白,共五大區帶;前白蛋白含量少,未必形成清楚可見的獨立峰。 前白蛋白位於白蛋白的陽極側,並非介於白蛋白與 α1 區之間。比較前白蛋白、白蛋白、CRP 與血紅素時,應掌握前白蛋白負電性較強、向陽極遷移較快;只比較白蛋白與 α、β、γ 球蛋白時,則以白蛋白最快。 實際區帶位置也受分子大小、形狀及支持介質的電滲流影響,不能把「靠近陰極」直接解讀成「帶正電」。γ-球蛋白本身向陽極的遷移能力較弱,在電滲流影響下可呈現向陰極的淨移動;本單元對 CRP 的判讀亦採陰極側遷移。因此,「所有血清蛋白都一定向陽極移動」過於絕對。 二、各區帶的主要蛋白成分 區帶代表成分判讀重點 前白蛋白前白蛋白,又稱 transthyretin(TTR)比白蛋白更靠近陽極;可攜帶甲狀腺素,並與視黃醇結合蛋白形成複合體。 白蛋白Albumin正常血清含量最多,形成最主要的電泳峰。 α1-球蛋白α1-抗胰蛋白酶、α1-酸性醣蛋白、α1-脂蛋白、α-胎兒蛋白(AFP)正常成人此區以α1-抗胰蛋白酶的量最多;AFP 通常含量很低。 α2-球蛋白結合蛋白(haptoglobin)、藍胞漿素(ceruloplasmin)、α2-巨球蛋白結合蛋白能結合游離血紅素;藍胞漿素常縮寫為 CER。 β-球蛋白運鐵蛋白(transferrin)、補體 C3、低密度脂蛋白(LDL)運鐵蛋白常縮寫為 TRF;完整 C3 在 EDTA 血漿電泳中仍位於 β 區。 γ-球蛋白免疫球蛋白抗體最主要分布於此區,但部分免疫球蛋白也可延伸至 β 區。 CRP 不列為本單元的典型 β 區成分,其位置偏向 γ 區或陰極側。遇到 β 區成分比較時,應辨認運鐵蛋白、C3 與 LDL;不要因為 CRP 是急性期蛋白,就將它放入 α 區或 β 區。 三、代表蛋白的相對遷移位置 常見代表蛋白由正極往負極排列為:白蛋白 → AFP → CER → TRF → CRP,分別對應白蛋白、α1、α2、β 與陰極側的位置。比較白蛋白、結合蛋白與 C3 時,順序則為白蛋白 → 結合蛋白 → C3。 視黃醇結合蛋白(retinol-binding protein,RBP)可與前白蛋白形成複合體。比較 RBP、白蛋白、AFP 與運鐵蛋白時,運鐵蛋白最靠近負極。比較白蛋白、運鐵蛋白、藍胞漿素與 CRP 的負電性時,則以 CRP 的負電荷最少作為判斷重點。 能比白蛋白更快向陽極移動的「甲腺素結合蛋白」,在此遷移概念中指甲狀腺素結合前白蛋白,即 TTR。TTR 與甲狀腺素結合球蛋白(TBG)是不同蛋白,不宜只看到「能結合甲狀腺素」便視為同一成分。 四、血清、血漿與體內溶血 正常血清不應有明顯纖維蛋白原帶,因為纖維蛋白原在凝血過程中已被消耗。血漿仍含纖維蛋白原,電泳時可在 β 與 γ 之間形成額外區帶,因此不宜把纖維蛋白原列為正常血清 β 區的固定成分。 體內溶血時,游離血紅素與結合蛋白結合,形成的複合體被清除,使血中結合蛋白下降。由於結合蛋白位於 α2 區,所以在區帶比較中,應選擇 α2-球蛋白下降。實際圖形仍受同區其他蛋白影響,並非每次溶血都會出現同等程度的整區下降。 五、由掃描面積計算蛋白濃度 掃描定量先將區帶面積換成占總面積的比例,再乘上總蛋白濃度: 區帶濃度(g/dL)=總蛋白濃度(g/dL)× 該區帶面積 ÷ 全部區帶總面積。 例如總蛋白為 7.0 g/dL,某區帶占總面積 12%,則濃度為 7.0 × 0.12=0.84 g/dL。面積單位 units 在相除時抵消,最後濃度單位仍為 g/dL。 分母必須使用全部區帶總面積;即使資料另列白蛋白面積,只要已給總面積,就不必先扣除白蛋白,也不能改用球蛋白總面積當分母。 常考陷阱 「前白蛋白在白蛋白與 α1 之間」:錯。前白蛋白位於白蛋白之前,更靠近陽極。 「最快的一定是白蛋白」:先看比較範圍。五大區帶中白蛋白最快;若包含前白蛋白,前白蛋白更快。最大峰則仍是白蛋白。 「靠近陰極就是帶正電」:錯。須分清淨電荷、蛋白本身的電泳遷移與電滲流造成的淨位移。 「γ-球蛋白或 CRP 向陰極移動,所以敘述必錯」:不可直接判錯;在本單元的鹼性電泳判讀下,須考慮電滲流與陰極側位置。 「α1 區最多的是 AFP」:錯。正常成人以 α1-抗胰蛋白酶最多;結合蛋白則屬 α2 區。 「CRP、C3 都是 β 區成分」:錯。C3 屬 β 區,CRP 不列為典型 β 區成分;EDTA 血漿中的完整 C3 也仍在 β 區。 「抗體全部只在 γ 區」:過於絕對。抗體最主要在 γ 區,但部分可出現在 β 區。 「體內溶血使白蛋白區下降」:應先想到結合蛋白消耗,對應 α2 區下降。 「區帶面積除以白蛋白面積即可算濃度」:錯。應除以總面積,再乘總蛋白濃度。 記憶口訣 正到負:前白、白、一、二、貝、伽。 一抗胰,二結藍;貝運鐵、C3、低脂;伽抗體。「一」指 α1,「二」指 α2,「低脂」指低密度脂蛋白。 面積占幾分,總蛋白乘幾分。