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學習重點 掌握電阻抗法（Coulter principle，又稱電壓脈衝式計數）：細胞通過微孔時造成電阻脈衝，脈衝數目代表細胞數，脈衝高度與細胞體積成正比。 理解流體動力聚焦（hydrodynamic focusing，鞘流）：使細胞單列、由孔洞中央通過並避免回流；稀釋樣本不是它的功能。 能判讀 RBC、PLT histogram，知道巨大血小板會被算成紅血球而使 RBC 高估，以及氣泡、血脂等干擾。 區分 VCS（Volume、Conductivity、Scatter）、光學散射法與流式細胞儀的原理、檢體處理及白血球分類能力。 核心觀念 一、電阻抗血球計數與 Coulter principle 電阻抗式血球分析儀在微孔兩側放置電極並通入直流電，孔內充滿電解質稀釋液。細胞本身幾乎不導電，通過微孔時會取代等體積的導電液體，使孔洞兩端的電阻短暫上升，形成一個電壓（電阻）脈衝。儀器依脈衝數目計算細胞數，依脈衝高度判斷細胞大小。 Coulter principle 所利用的是電子阻抗，不是高週電磁波、可見光或雷射光。「電壓脈衝式」「電阻阻抗」「Coulter 原理」指的都是同一類方法。 在孔徑、稀釋液與電流條件固定時，電阻變化量與通過細胞的體積成正比，而非與細胞表面積、形狀或導電性成正比。 特性說明 適用常規計數與大小測量電阻抗法是 CBC 最基本、最普遍的常規方法，可計數 RBC、WBC、PLT 並測量細胞大小（如 MCV）。 高再現性（優點）同一檢體重複測定，結果一致性良好。 低敏感性（缺點）只能以體積區分細胞，對大小相近或形態異常的細胞辨識能力有限。 易受物理性干擾（缺點）氣泡、血脂顆粒、細胞碎片等通過孔洞時也會產生脈衝，或造成孔洞堵塞，使結果失真。 二、流體動力聚焦（鞘流） 已稀釋的樣本流由外圍流速較快的鞘液包覆，被壓縮成細窄流束，使細胞： 單列依序通過偵測區，減少兩顆以上細胞同時通過（coincidence）造成的重疊脈衝； 由偵測孔中央通過，避免偏離中心造成體積判讀失真； 保持單向穩定流動，避免樣本回流、重複計數。 樣本稀釋是由稀釋系統在進入偵測區之前完成的，不是 hydrodynamic focusing 的用途。 三、RBC 與 PLT histogram 的判讀 電阻抗法依體積分別建立紅血球與血小板的分布圖。健康人的 RBC 曲線大致呈常態（鐘形）分布，但 PLT 曲線呈右偏（對數常態）分布，所以「兩者皆為常態分布」的說法是錯的。 RBC 與 PLT peak 重疊：大型血小板與小紅血球（如小球性紅血球、紅血球碎片）無法以體積區分，PLT 計數會有偏誤，須以血液抹片觀察或其他方法（如光學法、螢光法）計數血小板。 RBC histogram 與 RDW：可由 RBC 分布計算 RDW-CV 與 RDW-SD。RDW 只反映大小不均（anisocytosis），不能據以判斷紅血球形態（形狀）異常，形態仍須看抹片。 PLT histogram 平坦（無 peak）：可能是血小板減少，也可能是血小板凝集、檢體凝固或儀器干擾，不能據此確認血小板數目低下，須以抹片或重新採檢確認。 四、巨大血小板對阻抗計數的干擾 Giant platelet 體積接近甚至超過紅血球。阻抗法依體積設定閾值區分 PLT 與 RBC，巨大血小板的脈衝會落入 RBC 區間而被當成紅血球計數，因此造成紅血球數目高估，同時血小板數目偏低。 血紅素是溶血後以比色法另外測定，不受此影響；白血球計數也不是此題型的考點，不會因巨大血小板而「低估」。遇到疑似巨大血小板時，應以抹片確認。 五、VCS 原理（白血球五項分類） 儀器先在機內溶解紅血球，並使白血球維持接近原本的狀態，再同時測量三個參數，將白血球分為嗜中性球、淋巴球、單核球、嗜酸性球、嗜鹼性球。 代碼英文測量方式反映的細胞特性 VVolume（體積）低頻直流電阻抗細胞大小 CConductivity（導電性）高頻電流（無線電頻率）可穿透細胞膜細胞內部組成，如核質比、細胞核密度 SScatter（光散射）雷射光散射顆粒性、核分葉、表面結構等內部複雜度 VCS 的「C」是 Conductivity，不是 Coincidence、Count 或 Condensability。 六、光學散射法與 scattergram 光學法採用流式細胞原理：細胞經鞘流單列通過雷射光束，依散射光分析。 前向散射（forward scatter）：主要反映細胞大小。 側向散射（side scatter）：主要反映顆粒性與內部複雜度。 儀器本身即內建流式偵測系統，不需另外結合流式細胞儀，即可即時得出 RBC、WBC、PLT 的數量與比例，並繪出散射圖（scattergram）呈現各細胞群的分布，完成正常白血球的分類。若出現異常細胞群或警示旗標，再以抹片複檢；但不能說散射圖「無法表示細胞群分布、一定要再用顯微鏡觀察」。 七、流式細胞儀與自動化 CBC 的白血球檢驗比較 比較項目自動化 CBC 血球分析儀流式細胞儀 原理電阻抗、光學散射、VCS 等雷射散射加上螢光訊號 紅血球處理全血直接上機，上機前不需先溶血；由儀器於機內以試劑溶解紅血球以溶血劑溶解紅血球（可再清洗），不是靠離心移除紅血球 螢光抗體不需螢光抗體標記免疫分型須以螢光抗體標記細胞表面抗原 檢體互用流式處理後的樣本已溶血、染色或稀釋，不能直接再拿去做 CBC，兩種儀器的處理後檢體不可互換使用 常考陷阱 「電阻抗法不適用於常規血液細胞計數和大小測量」：錯。它正是常規 CBC 的主要方法；高再現性、低敏感性、氣泡或血脂干擾則都是正確敘述。 Coulter 原理用的是高週電磁波、可見光或雷射光：錯。用的是電子阻抗。 電阻變化與細胞表面積、形狀或導電性成正比：錯。與體積成正比。 hydrodynamic focusing 用來稀釋血液樣本：錯。單列通過、由孔中央通過、避免回流才是它的用途。 「健康人 RBC 與 PLT curve 皆為常態分布」：錯，PLT 為右偏分布。 「RDW 升高可判斷 RBC 形態異常」：錯，RDW 只代表大小不均。 「PLT histogram 沒有 peak 可確認血小板低下」：錯，可能是凝集或干擾，須抹片確認。 RBC 與 PLT peak 重疊：正確判斷是 PLT 計數有偏誤，須以抹片或其他方法計數。 巨大血小板造成 PLT 高估、Hb 高估或低估、WBC 低估：都錯。正解是 RBC 高估（PLT 則偏低）。題目寫「電壓脈衝式」就是阻抗法。 VCS 的 C 選 Coincidence、Count：錯，C 是 Conductivity。 「光學法所產生的圖無法表示細胞群分布」：錯，散射圖就是用來呈現細胞群分布。「光學法不需結合流式細胞儀即可即時分析」則是正確敘述。 「CBC 與流式細胞儀都要先溶血並做螢光標記」「流式細胞儀需先離心移除紅血球」「兩者樣本可互相再用」：皆錯。正解是 CBC 上機前不需溶解紅血球，也不需螢光抗體。 記憶口訣 「阻抗過孔看體積，脈衝個數就是數；鞘流排隊走中央，稀釋不是它的事；巨板冒充紅血球；VCS＝大小、導電、散射；散射圖上看族群；CBC 全血機內溶，流式才要螢光抗。」