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學習重點 超活體染色（supravital stain）是將新鮮、未固定的全血與染劑混合培養後再製片。常用染劑為 new methylene blue（NMB）與 brilliant cresyl blue（BCB）。這類染劑不是還原試劑。 超活體染色可染出的構造包括網狀紅血球的殘餘 RNA、Hb H 內涵物、Heinz body 與 Howell-Jolly body。Ringed sideroblast 不在其列，它要用骨髓抹片加 Prussian blue 鐵染色才看得到。 Hb H disease 屬於甲型（α）海洋性貧血。以 NMB 或 BCB 染色時，紅血球內會出現多數細小、均勻分布的藍綠色顆粒，外觀像高爾夫球，可協助鑑別甲型海洋性貧血。 多染性紅血球（polychromatophilic RBC）是 Wright 染色下的名稱，在超活體染色下就是網狀紅血球。它的特徵是體積稍大、整顆呈灰藍色、沒有細胞核。 核心觀念 一、超活體染色的原理與操作特點 超活體染色是在細胞尚未固定、仍「活著」時，讓染劑進入紅血球並與特定物質作用。一般做法是先把全血與染劑混合、靜置培養一段時間，再推片觀察。經甲醇固定後才染色的 Wright-Giemsa 染色看不到這些構造，超活體染色則可以。 NMB 與 BCB 都是鹼性染料。它們能讓網狀紅血球中的殘餘核糖體 RNA 沉澱、聚集，形成藍色的網狀或顆粒狀物。 這類染劑具氧化性。它們能使不穩定的血紅素（例如 Hb H）氧化、變性而沉澱成內涵物。因此「染色劑屬於還原試劑」是錯誤敘述。 觀察 Hb H 內涵物所需的培養時間通常比網狀紅血球計數長，因為要讓 Hb H 有足夠時間被氧化沉澱。 二、超活體染色可見與不可見的構造 構造本質超活體染色能否顯示典型形態／備註 網狀紅血球（reticulocyte）殘餘核糖體 RNA可以深藍色網狀、絲狀或點狀物；用於網狀紅血球計數 Hb H 內涵物β 鏈四聚體（β₄）氧化沉澱可以（NMB、BCB）多數細小、大小一致、均勻分布的顆粒，呈高爾夫球狀 Heinz body氧化變性、沉澱的血紅素可以一至數個較大的不規則顆粒，常貼附於細胞膜邊緣；Wright 染色看不到 Howell-Jolly body殘餘 DNA（核碎片）可以單一、圓形、緻密的小體；Wright 染色下也看得到（深紫色） Ringed sideroblast有核紅血球前驅細胞的核周粒線體堆積鐵不能需以骨髓抹片加 Prussian blue 鐵染色，鐵顆粒環繞細胞核 三、Hb H disease 與高爾夫球狀內涵物 Hb H disease 是甲型海洋性貧血中較嚴重的型別，通常是四個 α 基因中有三個缺失或功能異常。α 鏈生成不足時，過剩的 β 鏈會自行結合成 β₄ 四聚體，也就是 Hb H。Hb H 不穩定、容易氧化。經 BCB 或 NMB 超活體染色後，Hb H 會在紅血球內沉澱成許多細小顆粒，平均散布於整顆細胞，看起來像高爾夫球表面的凹點。這個表現可以用來輔助鑑別甲型海洋性貧血。 觀察 Hb H 內涵物的常用染劑： new methylene blue：可以使用。 brilliant cresyl blue：可以使用。 Prussian blue：不適用。它是鐵染色，用於 siderocyte、sideroblast 與骨髓鐵儲存。 trypan blue：不適用。它主要用於細胞存活率的染料排除試驗。 其他異常血紅素不會形成高爾夫球狀內涵物： 異常血紅素常見周邊血表現 Hb H（β₄）超活體染色見高爾夫球狀內涵物；小球性低色素 Hb E小球性、target cell Hb Ctarget cell、Hb C 結晶 Hb S鐮刀形紅血球（sickle cell） 四、網狀紅血球與多染性紅血球 網狀紅血球是剛脫核、尚未完全成熟的紅血球，仍含殘餘核糖體 RNA，約一至兩天後才在周邊血中成熟為紅血球。同一群年輕紅血球，在不同染色下有不同名稱： 比較項目網狀紅血球多染性紅血球 使用染色超活體染色（NMB、BCB）Wright／Wright-Giemsa 染色 看到的樣子細胞內有深藍色網狀或顆粒狀 RNA 沉澱整顆細胞呈均勻灰藍色，體積略大，無中央淡染區或較不明顯，無細胞核 顏色由來RNA 被鹼性染料沉澱成網RNA 吸藍色染料，加上血紅素吸紅色染料，混合成灰藍色 臨床意義兩者增加都代表骨髓造血活躍，例如溶血、急性失血後的代償，或貧血治療後的反應 五、Wright 染色抹片中易混淆的細胞 細胞辨識關鍵 多染性紅血球沒有細胞核，大小與紅血球相近或略大，整顆呈灰藍色 Target cell顏色與一般紅血球相同，中央有一團血紅素，形似靶心 Giant platelet體積接近或大於紅血球，內含紫紅色顆粒，形狀較不規則，沒有血紅素的紅色調 Normoblast（有核紅血球）有圓形、深染的細胞核 常考陷阱 「超活體染色劑屬於還原試劑」是錯的。NMB 與 BCB 是具氧化性的鹼性染料，能使 Hb H 氧化沉澱。 「超活體染色可用來鑑別甲型海洋性貧血」是對的。依據是看到 Hb H 高爾夫球狀內涵物。不要因為它不是確診檢查，就誤判這個敘述錯誤。 「超活體染色可染上 Heinz body、網狀紅血球核酸、Howell-Jolly body」都是對的。問「不包括哪一項」時，答案是 ringed sideroblast，因為它屬於骨髓鐵染色的範圍。 Prussian blue 與 trypan blue 名稱裡有「blue」，容易被誤選。Prussian blue 染鐵，trypan blue 測存活率，兩者都不是 Hb H 內涵物的染色法。 「高爾夫球狀」只對應 Hb H。Hb C 會出現結晶與 target cell，Hb S 會出現鐮刀形紅血球，Hb E 會出現 target cell，都不會形成高爾夫球狀內涵物。 Hb H 是 β₄，不是 α₄，也不是 γ₄。γ₄ 是 Hb Bart's。 判讀 Wright 染色圖片時，先看有沒有細胞核，再看顏色。沒有細胞核而整顆偏灰藍色的是多染性紅血球。有細胞核的是 normoblast。中央有紅點的是 target cell。帶紫色顆粒、沒有血紅素的是 giant platelet。 記憶口訣 「新亞甲藍、煌焦油藍，氧化不還原；網紅、亨氏、豪喬全上色，環鐵母細胞要找普魯士藍。」 「α 少 β 多，β 四成 H，打成高爾夫。」 「Wright 灰藍沒有核，就是多染性的網紅。」