學習重點 紅血球包涵體的成分:Heinz body 為氧化變性、沉澱的血紅素;Howell-Jolly body 為核 DNA 殘留;Pappenheimer body 為含鐵顆粒(非血基質鐵);basophilic stippling 為聚集的核糖體 RNA。 超活體染色的觀察範圍:brilliant cresyl blue、new methylene blue 等超活體染色可以看到 Heinz body、Howell-Jolly body、Pappenheimer body 與 basophilic stippling,也用來計數網狀紅血球。 「需要」超活體染色的只有 Heinz body:Howell-Jolly body、Pappenheimer body 與 basophilic stippling 在 Wright、Giemsa 等 Romanowsky 染色抹片即可看見;Heinz body 在一般抹片看不到,必須用超活體染色。 鐵染色的鑑別價值:basophilic stippling 與 Pappenheimer body 在 Romanowsky 染色下都是藍紫色顆粒,要區分兩者最好用 iron stain(普魯士藍)。Pappenheimer body 呈陽性,basophilic stippling 呈陰性。 核心觀念 一、紅血球包涵體的成分、形態與染色 包涵體 主要成分 典型形態與分布 Romanowsky 染色 超活體染色 Iron stain Basophilic stippling 聚集的核糖體 RNA 多個細小或粗大的藍紫色點,均勻散布於整個紅血球;粗點常見於鉛中毒、地中海貧血 可見 可見 陰性 Howell-Jolly body 核 DNA 殘留 通常單一、圓形、緻密的深紫色小體,多位於細胞邊緣;常見於脾臟切除或脾功能低下 可見 可見 陰性 Pappenheimer body 含鐵顆粒,為非血基質鐵(含鐵的粒線體或鐵蛋白聚集) 少數幾顆小顆粒,常成群聚集於細胞周邊 可見(藍紫色) 可見 陽性(稱 siderotic granules,此細胞稱 siderocyte) Heinz body 氧化變性、沉澱的血紅素 圓形、折光性的小體,附著於紅血球膜內側,可單顆或多顆 看不到 必須用此法才看得到 陰性 二、超活體染色與 Heinz body 超活體染色(supravital stain)是在血液未固定、細胞仍存活的狀態下,將血液與染劑混合培養後再製片觀察。常用染劑包括 brilliant cresyl blue、new methylene blue;Heinz body 也可以用 crystal violet 或 methyl violet 顯示。 紅血球受到氧化壓力時,血紅素會變性並沉澱成 Heinz body,例如 G6PD 缺乏症、不穩定血紅素疾病或氧化性藥物所致。它在 Wright、Giemsa 等 Romanowsky 染色抹片上無法看見,因此檢查 Heinz body 時一定要用超活體染色,iron stain 與 PAS stain 都不適用。 在 brilliant cresyl blue 染色的血片上,如果紅血球膜邊緣附著一顆或數顆圓形、界線清楚的深藍色小體,就是 Heinz body。同一張片子裡,網狀紅血球的殘餘 RNA 會沉澱成藍色的網狀或顆粒狀構造,判讀時不要和 Heinz body 混淆。 含 Heinz body 的紅血球經過脾臟時,巨噬細胞會把 Heinz body 連同部分細胞膜一起摘除,留下的缺口形紅血球就是 bite cell,在一般抹片上即可看到。Heinz body 是包涵體,bite cell 是摘除後的紅血球形態,兩者不同。 三、Basophilic stippling 與 Pappenheimer body 的鑑別 這兩者在 Wright 或 Giemsa 染色下都呈藍紫色顆粒,外觀容易混淆,但成分不同: Basophilic stippling:成分是核糖體 RNA,顆粒多,均勻散布於整個紅血球,不含鐵。 Pappenheimer body:成分是鐵,顆粒少,常成群位於細胞周邊。 因此要區分兩者,最好的方法是 iron stain,也就是普魯士藍反應(Prussian blue)。Pappenheimer body 會被染成藍色顆粒,basophilic stippling 則不著色。Romanowsky 染色下兩者都著色,無法鑑別。Peroxidase stain 與 esterase stain 是白血球的細胞化學染色,用來分辨骨髓系與單核球系細胞,與這兩種包涵體的鑑別無關。 四、Howell-Jolly body 與其他易混淆構造 Howell-Jolly body 是紅血球脫核時殘留的 DNA 碎片,正常情況下會被脾臟清除,所以在脾臟切除或脾功能低下時增加。它在一般 Romanowsky 染色抹片上就看得到,用超活體染色也看得到。 Malaria(瘧原蟲)是寄生於紅血球內的病原體,不是紅血球本身產生的包涵體,通常以 Giemsa 染色的厚、薄血片鑑定。看到「超活體染色的附著於膜的圓形小體」時,不要選 Malaria。 常考陷阱 「可以」和「需要」不同:題目問「何者可利用超活體染色觀察到」,Heinz body、Howell-Jolly body、Pappenheimer body、basophilic stippling 四者都對。題目問「何者需要用活體染色才看得到」,只有 Heinz body 正確。 誤以為 Romanowsky 抹片就能看 Heinz body:Heinz body 在 Wright 或 Giemsa 抹片上看不到。檢查 Heinz body 要選 supravital stain,不能選 Romanowsky stain、iron stain 或 PAS stain。 Brilliant cresyl blue 染色圖的判讀:膜邊緣附著的圓形深色小體是 Heinz body。不要因為小體單一且圓,就誤判為 Howell-Jolly body;也不要誤判為 Pappenheimer body 或 Malaria。 把 basophilic stippling 當成含鐵顆粒:basophilic stippling 是 RNA,iron stain 陰性。只有 Pappenheimer body 含鐵。 鑑別用錯染色:區分 basophilic stippling 與 Pappenheimer body 要用 iron stain。Romanowsky stain 下兩者都著色,peroxidase stain 和 esterase stain 是白血球用的染色,都不能用來鑑別。 把 Howell-Jolly body、Pappenheimer body 或 basophilic stippling 選為「必須」超活體染色:這三者在一般抹片就能辨認,不需要靠超活體染色。 把 Heinz body 和 bite cell 當成同一物:Heinz body 是膜內側的變性血紅素;bite cell 是 Heinz body 被脾臟摘除後留下的缺口形紅血球。 記憶口訣 「Heinz 要活染,Howell 留核團;Pappen 含鐵藍,嗜鹼點是 RNA。」 再記:「四種都『可』活染,只有 Heinz『必』活染;點點和鐵粒,iron stain 分。」