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學習重點 HbF同時具有抗鹼與抗酸特性：在鹼性環境中，HbF是常見血紅素中最不容易變性的；在酸性環境中，HbF也最不容易被洗脫。 鹼性變性法（alkaline denaturation test）用於HbF定量；酸洗脫法（acid elution test/stain）用於偵測紅血球中的HbF。 能檢測HbF的方法包括血紅素電泳、HPLC、鹼性變性法與酸洗脫法；超活染色（supravital stain）不能檢測HbF。 Kleihauer–Betke試驗的原理是「胎兒血較母親血耐酸」，可用於估算胎兒血流入母體的量。 新生兒口中鮮血的來源鑑別：酸洗脫後紅血球多數保留染色表示來自嬰兒，多數呈無色表示來自母體。 核心觀念 一、HbF的抗變性 胎兒血紅素（HbF）由兩條α鏈與兩條γ鏈組成（α2γ2），成人主要血紅素HbA則為α2β2。由於γ鏈結構與β鏈不同，HbF對鹼與酸的耐受性都明顯高於HbA、HbA2、HbS等血紅素。 抗鹼性：在鹼性環境中，HbA、HbA2、HbS等會變性沉澱，HbF仍可保持原有性質。因此在比較各種血紅素時，鹼性環境下最不容易變性的是HbF。利用這一點，把溶血液以鹼處理後，測定未變性、仍留在溶液中的血紅素量，即可計算HbF比例，此即鹼性變性法，主要用途是HbF定量。 抗酸性：將固定後的血液抹片浸於酸性緩衝液，HbA會被洗出細胞，HbF則留在紅血球內。再染色後，含HbF的紅血球呈現染色，以HbA為主的紅血球只剩細胞膜，外觀無色或近乎無色（俗稱鬼影細胞，ghost cell）。此即酸洗脫染色，目的在偵測紅血球中的HbF。 二、胎兒血紅素的檢測方法比較 檢測方法 主要原理 能否檢測HbF 典型結果或用途 血紅素電泳 不同血紅素電荷不同，在電場中遷移位置不同 可以 依位置辨認HbF，配合密度計估算比例 高效液相層析（HPLC） 依血紅素性質分離並定量 可以 報告HbF百分率 鹼性變性法 多數血紅素在鹼液中變性，HbF耐鹼而保留 可以（定量） 依殘存血紅素量計算HbF比例 酸洗脫染色（Kleihauer–Betke） HbA被酸洗脫，HbF耐酸而保留於細胞內 可以（偵測含HbF的細胞） 含HbF的紅血球染色，成人紅血球無色 超活染色 未固定的活細胞中，網狀物質或變性血紅素沉澱被染色 不能 觀察網狀紅血球、Heinz body、HbH包涵體 其他血紅素各有專屬的檢查方式：HbS常以溶解度試驗或鐮刀化試驗檢查；HbH以超活染色觀察包涵體；HbA2以管柱層析或HPLC定量；HbA1c（糖化血色素）用於評估血糖控制，以HPLC或免疫法測定。這些都不是鹼性變性法或酸洗脫法的檢測目標。 三、Kleihauer–Betke酸洗脫試驗 Kleihauer–Betke試驗就是酸洗脫染色的代表方法，常用來偵測及估算胎母出血（胎兒血流入母體）的量。胎兒紅血球含大量HbF，母體紅血球以HbA為主。取母血製成抹片，經固定、酸洗脫、染色後： 胎兒紅血球：HbF耐酸，留在細胞內，保留染色。 母體（成人）紅血球：HbA被酸洗出，呈無色的鬼影細胞。 計算染色細胞占全部紅血球的比例，可估算進入母體循環的胎兒血量，作為Rh(D)陰性母親給予抗D免疫球蛋白劑量的參考。偵測原理是胎兒血較母親血耐酸，不是耐鹼、耐高溫或耐低溫。 四、新生兒口中鮮血的來源鑑別 初生新生兒嘴邊冒出鮮血，可能是嬰兒本身出血，例如消化道出血；也可能是吞入母體血液，例如分娩時的產道血或乳頭破皮出血。兩者處理方式完全不同，因此必須鑑別。 大便潛血反應：若懷疑新生兒消化道出血，可做大便潛血反應，確認消化道內是否有血。但潛血陽性只表示有血，不能分辨血液來自嬰兒還是母親。 Kleihauer試驗：取得吐出物（含鮮血）後，應立刻進行Kleihauer試驗，以測定鮮血中的紅血球是否含HbF，藉此鑑別出血原因。立刻處理是為了避免紅血球破壞而影響判讀。 判讀方向如下： 酸洗脫後紅血球外觀 代表意義 血液來源 大多數保留染色 含HbF，耐酸 嬰兒（新生兒本身出血） 大多數呈無色 以HbA為主，被酸洗脫 母體（吞入母血） 補充：臨床上另有Apt試驗，是利用HbF的抗鹼性鑑別新生兒吐出物或糞便中的血液。加鹼後仍維持粉紅色表示胎兒血，轉為黃褐色表示成人血。它與Kleihauer試驗的目的相同，但一個用鹼、一個用酸。 常考陷阱 「鹼性環境下最不易變性的是HbA、HbA2或HbS」：錯。HbA、HbA2、HbS在鹼中都會變性，只有HbF耐鹼。 「超活染色可檢測HbF」：錯。超活染色用來看網狀紅血球、Heinz body與HbH包涵體。電泳、HPLC、鹼性變性法才是可檢測HbF的方法，看到「何者不能檢測HbF」就選超活染色。 「鹼性變性法用於HbH、HbS或HbA2定量」：錯。鹼性變性法是HbF定量。 「酸洗脫法偵測HbS、HbH、HbA1c或HbA」：錯。酸洗脫的目的是偵測HbF。HbA正是被洗掉的那一種，不是被偵測的對象。 「Kleihauer–Betke原理是胎兒血較耐鹼、耐高溫或耐低溫」：錯。Kleihauer試驗是酸洗脫，原理是胎兒血較母親血耐酸。耐鹼是鹼性變性法與Apt試驗的原理，不要混用。 「Kleihauer試驗發現紅血球大多無色，代表血液來自嬰兒」：錯。無色表示HbA已被洗脫，代表成人（母體）血；保留染色才代表來自嬰兒。這是最常見的顛倒陷阱。 「新生兒口中有血可做大便潛血反應」「取得檢體應立刻做Kleihauer試驗」「Kleihauer試驗可測紅血球是否含HbF」：這些敘述都是正確的，不要誤選為錯誤選項。 記憶口訣 「鹼測F、酸洗F；F留色是寶寶，無色鬼影是媽媽。」 補充記法：Kleihauer用酸（K酸），Apt用鹼；超活染色看H（HbH包涵體），不看F。