學習重點 急性白血病流式判讀的步驟:先用 CD45/SS 圈出母細胞,再用多組抗原判斷系列(髓系、B 淋巴系、T 淋巴系)與成熟度,並配合形態及細胞化學染色。不能只憑單一標記下結論。 ALL 與 AML 的區別:ALL 母細胞多為 TdT 陽性、MPO 陰性、沒有 Auer rods,核/細胞質比較高。AML 母細胞多為 MPO、CD13、CD33、CD117 陽性,可見 Auer rods。 前驅 B 與前驅 T 淋巴母細胞:B-ALL 看 CD19、CD10、CD22、cyCD79a。T-ALL 看 cyCD3、CD2、CD7。ETP-ALL 的典型表現是 CD7 陽性、CD1a 陰性、CD8 陰性。 異常表現(aberrant expression):B-ALL 母細胞 CD45 很低或陰性,是有別於正常 B 前驅細胞的異常表現。ALL 偶可共表現 CD13、CD33,這也屬於異常表現,不能據此改判 AML。 特殊型白血病的代表標記:急性巨核芽球白血病看 CD41、CD61。B-CLL 為 CD5+/CD19+。毛細胞白血病為 CD19、CD20、CD25 陽性,CD5 陰性。 核心觀念 一、流式免疫分型的基本判讀架構 流式免疫分型通常以 CD45 對側散射光(CD45/SS)找出母細胞群,母細胞多位於 CD45 弱、側散射光低的區域。成熟淋巴球的 CD45 最強、側散射光低;成熟顆粒球的 CD45 中等、側散射光高。圈出母細胞後,再用一組互相支持的抗原判定系列。 系列常用支持性標記判讀重點 髓系MPO、CD13、CD33、CD117;單核系 CD14、CD64、CD11bMPO 是髓系最重要的依據。CD13、CD33、CD117 常見於 AML,在 ALL 一般為陰性。 B 淋巴系CD19、CD22、cyCD79a、CD10;成熟 B 細胞 CD20、表面 Ig前驅 B-ALL 常為 CD10 強陽性、CD20 弱或陰性,並可表現 CD34、HLA-DR。 T 淋巴系cyCD3、CD2、CD5、CD7、CD1a、CD4/CD8胞質型 CD3 對 T 系列最具專一性。CD2、cyCD3、CD7 陽性支持 T-ALL。 未成熟程度TdT、CD34、HLA-DRTdT 是前驅淋巴母細胞的重要標記。CD34、HLA-DR 共表現是未成熟細胞的正常現象,不算異常。 二、ALL 與 AML 的整合判讀 形態方面:ALL 母細胞較小、胞質少,核/細胞質比較高,沒有 Auer rods。AML 母細胞胞質較多,核/細胞質比相對較低,可見 Auer rods。兩者形態有重疊,僅憑形態常無法確實區分,需要細胞化學染色與表面標記輔助。 細胞化學方面: MPO 與 Sudan black B(SBB)在 AML 為陽性,在 ALL 為陰性。 非特異性酯酶(NSE)主要見於單核系。 氯乙酸酯酶(特異性酯酶)主要見於顆粒球系。 NSE 與氯乙酸酯酶都屬髓系染色,不能用來區分 ALL 與 AML。 ALL 可見 PAS 塊狀陽性。 免疫標記方面:最能區分兩者的組合是 ALL:TdT 陽性;AML:CD117(及 CD13、CD33)陽性。CD45 在兩者皆可表現,CD14 是單核系標記,都不能作為 ALL 的區分依據。 三、前驅 B-ALL 的流式特徵與異常表現 典型前驅 B-ALL 為 CD19、CD10、CD22、cyCD79a、TdT、CD34、HLA-DR 陽性,CD20 弱或陰性。即使 CD19 弱陽性、CD20 陰性,只要 CD10 強陽性,仍符合 B 淋巴母細胞。 若母細胞的 MPO 染色為陰性(只有殘存的正常顆粒球呈陽性),表示母細胞沒有髓系分化。此時若流式檢查顯示 cyCD79a 陽性,即支持前驅 B-ALL。cyCD3 屬 T 系,CD14、CD33 屬髓系或單核系,在這種情況下都不應是主要陽性標記。 CD45 低表現或陰性是 B-ALL 母細胞最具特色的異常表現。正常 B 前驅細胞(hematogones)會隨成熟逐漸表現 CD45,白血病性淋巴母細胞則常明顯偏低甚至陰性。相對地,下列表現在 B-ALL 都屬正常,不算異常: CD34 與 HLA-DR 共表現:未成熟細胞本來就有。 CD5 陰性、CD3 陰性:B 細胞本來就沒有這些 T 系標記。 B-ALL 若同時出現 CD45 陰性與部分 CD13、CD33 陽性,屬於淋巴系白血病合併髓系抗原異常共表現,不能判為髓系白血病。 四、前驅 T-ALL 與 ETP-ALL T-ALL 常表現 cyCD3、CD2、CD7、TdT,CD1a、CD4、CD8 依成熟階段而異。臨床上常見於年輕男性,伴有縱膈腔腫瘤。若血液或骨髓中出現成群的不成熟細胞,加上 CD45/SS 圖呈淋巴母細胞特徵,應判為 lymphoblasts,而非 myeloblasts 或癌細胞、肉瘤細胞。 Early T-cell precursor ALL(ETP-ALL)停留在極早期的 T 前驅階段,典型表現為: CD7 陽性、CD1a 陰性、CD8 陰性。 CD5 弱或陰性。 可表現 CD34、CD117、HLA-DR、CD13、CD33 等幹細胞或髓系抗原。 cyCD3 陽性,證明仍屬 T 淋巴系。 五、特殊白血病與成熟淋巴腫瘤的標記 疾病代表性免疫標記重點 急性巨核芽球白血病(AML M7)CD41、CD61、CD42bCD41/CD61 是血小板糖蛋白,診斷最有幫助。CD13、CD117 不夠專一,CD19 屬 B 系。 紅血球白血病(AML M6)血型糖蛋白 A(CD235a)、CD71CD3、CD5 是 T 細胞標記,與 M6 無關。 B-CLLCD19、CD5、CD23 陽性;CD20 弱、表面 Ig 弱CD5 與 CD19 共表現是典型配對。 套細胞淋巴瘤CD19、CD5 陽性,CD23 陰性;cyclin D1 陽性以 CD23 與 cyclin D1 和 CLL 區別。 毛細胞白血病CD19、CD20、CD25 陽性,CD5 陰性;CD103、CD11c 陽性屬 B 細胞腫瘤,不表現 CD4、CD8 等 T 細胞標記。 MALT 淋巴瘤CD19、CD20 陽性;CD5、CD10、CD23 多為陰性屬成熟小 B 細胞淋巴瘤,TdT 陰性。 常考陷阱 「CD45 陰性加上 CD13、CD33 部分陽性,符合髓系白血病」:錯。若同時有 CD19、CD10 強陽性與 CD34,應判為 B-ALL 合併髓系抗原異常共表現。 「AML 細胞的核/細胞質比較 ALL 大」:錯,方向相反。ALL 的核/細胞質比較高;AML 胞質較多,且可有 Auer rods。 B-ALL 的異常表現選 CD34 與 HLA-DR 共表現、CD5 陰性或 CD3 陰性:這些都是正常表現。Low CD45 才是真正的異常表現。 以 SBB/MPO、NSE/氯乙酸酯酶、CD14/CD45 區分 ALL 與 AML:這些不是正確的區分組合。正確答案是 ALL:TdT+;AML:CD117+。 系列標記配錯: T-ALL 配 CD19、CD20、CD22(這些是 B 系)。 T-ALL 配 CD13、CD33、CD117(這些是髓系)。 T-ALL 配 CD11b、CD14、CD16(這些是單核或 NK 系)。 T-ALL 的正確組合是 CD2、cyCD3、CD7。 ALL 呈陰性的標記:在 CD13、CD10、CD7、CD2 中,CD13 是髓系標記,ALL 一般為陰性。CD10 見於 B-ALL,CD7、CD2 見於 T-ALL。 「AML 常有、ALL 少見」的標記:選 CD13。CD7 屬 T 系,CD19、CD10 屬 B 系。 ETP-ALL 的 CD 組合:出現 CD1a 陽性、CD8 陽性或 CD7 陰性的選項都錯。正確答案是 CD7+/CD1a-/CD8-。 毛細胞白血病配 CD4、CD8 或 CD5 陽性:錯。它是 CD5 陰性的 B 細胞腫瘤,CD25、CD103、CD11c 陽性。 巨核芽球白血病選 CD117 或 CD13:錯,應選血小板標記 CD41(或 CD61)。 MPO 陰性的母細胞選 cyCD3 或 CD33:需配合流式圖判斷。若母細胞 CD19、CD10 陽性,陽性者應為 cyCD79a。 記憶口訣 「先圈母細胞,再看系列:髓看 MPO、13、33、117;B 看 19、10、22、79a;T 看 cyCD3、2、7;淋巴母細胞看 TdT。」 ETP:「7 留、1a 無、8 無」。 M7 看血小板 41、61。CLL 是「5 加 19」。毛細胞是「19、20、25 有,5 無」。 B-ALL 異常看「CD45 低」;34 加 DR 是正常的未成熟表現。