學習重點 分清 PRP 與 PPP 的用途:富含血小板血漿(PRP)最主要用於血小板凝集試驗;乏血小板血漿(PPP)用於 PT、aPTT、凝血酶時間(TT)等凝血檢驗。 離心條件與合格標準:PRP 用低速離心(約 200×g、10 分鐘左右);PPP 用高速離心,典型條件為 2000×g、10 分鐘,也可 2000×g、15 分鐘或採兩次離心。製成的 PPP 血小板數須低於 10,000/μL。 PPP 製備不需冷藏:凝血檢體應在室溫保存並及時處理,「離心前先置於 4℃」是錯誤敘述。 凝血終點偵測方法:包括光學法、電子機械法、機械法、試管傾斜法及目視法,各自偵測不同的物理訊號。 光學法最怕顏色與濁度:嚴重黃疸、脂血、溶血檢體最容易干擾光學法;遇到這類檢體,改用電子機械法最適合。 核心觀念 一、PRP 與 PPP 的製備及用途 PRP 是 platelet-rich plasma,即富含血小板的血漿;PPP 是 platelet-poor plasma,即血小板含量極低的血漿。兩者都由加入檢驗用抗凝劑(凝血檢驗常用 3.2% 檸檬酸鈉)的全血離心取得。兩者的差別在離心力與離心時間:低速離心時血小板留在血漿中,高速離心時血小板會沉降。 項目 PRP:富含血小板血漿 PPP:乏血小板血漿 離心策略 低速、短時間離心(約 200×g、10 分鐘左右),紅血球與白血球沉降,血小板仍懸浮在血漿中。 高速離心使血小板沉降。典型條件為 2000×g、10 分鐘,也可用 2000×g、15 分鐘。 血小板要求 保留足量且具功能的血小板。 血小板數須低於 10,000/μL。可取第一次離心的上清液再離心一次(兩次離心程序),進一步降低血小板數。 主要用途 血小板凝集試驗及其他血小板功能檢驗。 PT、aPTT、TT、纖維蛋白原及凝血因子檢驗。 保存溫度 室溫。低溫會活化血小板,影響凝集結果。 室溫並及時處理。不需也不宜先冷藏。 血小板凝集試驗是在 PRP 中加入 ADP、膠原蛋白、腎上腺素等致凝集劑,觀察血小板聚集造成的透光度變化,所以必須用含大量功能正常血小板的 PRP。凝血檢驗要反映凝血因子的活性,殘留血小板會釋出磷脂等物質並影響凝固時間,所以要用血小板盡量少的 PPP。凝集用富、凝血用乏,兩者不可混用。 PT、aPTT、TT 都不使用 PRP,題目若問 PRP「最主要」的用途,答案是血小板凝集試驗。 二、PPP 製備的正確與錯誤敘述 正確:以 2000×g 離心 10 分鐘或 15 分鐘製備。 正確:離心後血漿血小板數須低於 10,000/μL,並不要求完全不含血小板。 正確:可使用兩次離心程序。 錯誤:全血離心前須先置於 4℃ 冷藏。凝血檢體冷藏可能造成第 VII 因子冷活化、第 VIII 因子及 vWF 活性下降,也會活化血小板,所以應在室溫保存並儘速離心。 三、凝血終點的偵測原理 PT、aPTT 等試驗的原理是:在血漿中加入試劑後開始計時,偵測到纖維蛋白凝塊形成時停止,這個時間點就是反應終點(end point)。不同方法偵測的物理訊號不同,受檢體顏色或濁度干擾的程度也不同。 方法 終點判定原理 特性與干擾 光學法(photo-optical) 持續測量光線通過反應液的透光度或散射光。纖維蛋白形成後濁度增加、透光度下降,達到設定的變化量即判定為凝固。 自動化、敏感,但最容易受嚴重黃疸、脂血、溶血干擾。檢體本身的顏色或濁度會使基線吸光值過高,造成無法判讀或終點誤判。 電子機械法(electromechanical) 以纖維蛋白凝固計(fibrometer)為代表。活動電極反覆進出反應液,纖維蛋白絲形成後連通兩電極間的電路,計時即停止。 不依賴光線穿透,不受黃疸、脂血等顏色或濁度干擾,是這類異常檢體最適合的方法。 機械法(mechanical) 利用鋼珠、磁珠或探針的運動變化判斷凝固,例如凝塊形成使鋼珠擺動幅度改變或黏度上升。 偵測物理運動變化,不受檢體顏色及濁度影響。 試管傾斜法(tilt tube) 人工於 37℃ 定時傾斜試管,看到凝塊形成即為終點。 屬人工方法,判讀主觀、再現性較差、費時。檢體混濁或顏色深時也可能影響肉眼判讀。 直接目視觀察法 檢驗者直接以肉眼觀察凝塊出現。 主觀性高,不是處理干擾檢體的最佳選擇。 嚴重黃疸檢體含大量膽紅素,顏色深而吸光度高;脂血檢體含大量脂質(如乳糜微粒),本身就呈乳白混濁;溶血檢體則含游離血紅素。這三種情形都會改變光學法所依賴的基線透光度,所以題目問「哪一種方法最容易受干擾」時選光學法,問「哪一種方法最適合」時選電子機械法。 常考陷阱 PRP 用途選成 PT、aPTT 或 TT:這三項都使用 PPP。PRP 最主要用於血小板凝集試驗。 PPP 離心條件選低速:100×g 或 200×g 都屬低速,只能得到 PRP。PPP 要選 2000×g,選項中只有高速的才是答案。 「全血離心前須先置於 4℃ 冷藏」:這是錯誤敘述。凝血與血小板檢體都應在室溫處理,冷藏會造成凝血因子及血小板的變化。 以為 PPP 必須完全不含血小板:標準是低於 10,000/μL,不是零。 以為兩次離心是錯誤做法:兩次離心是可接受的 PPP 製備程序,可以進一步降低血小板數。 題型反轉要看清楚:問「最容易受黃疸或脂血干擾」選光學法;問「遇到黃疸或脂血檢體最適合採用」選電子機械法。 以為人工法最不受干擾:試管傾斜法與目視法雖然不使用光學偵測,但判讀主觀,也可能受檢體外觀影響,所以不是最適合的選項。 光學法的干擾只記溶血:黃疸、脂血、溶血都是光學法的典型干擾。 記憶口訣 「凝集要富,凝血要乏;低轉兩百得 PRP,高轉兩千得 PPP;血小板一萬以下、室溫不冰。」 「黃脂溶,光最怕;換電機,不怕色。」光學法最容易受黃疸、脂血、溶血干擾,改用電子機械法。