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學習重點 區分三種螢光分析途徑：藥物本身具有螢光、經化學衍生化產生螢光，以及與螯合試劑形成螢光錯合物。 掌握微量鋁的分析：注射用水、血液透析液中的Al³⁺，以8-hydroxyquinoline（8-羥基喹啉，選項中也可能寫成8-hydroxyquinolone）形成螢光錯合物，再以螢光光譜法測定，感度最高。 熟記長葉毛地黃苷錠溶離試驗：主成分以螢光分析法定量，取樣後以強酸與雙氧水處理，合格標準為1小時內釋放不得少於80%；不是加入鋁離子形成錯合物。 理解核黃素的含量測定：使用螢光分光儀，先測總螢光，再加入低亞硫酸鈉（sodium hydrosulfite）還原核黃素、破壞其螢光，以測得雜質螢光並扣除。 核心觀念 一、先判斷螢光從哪裡來 螢光分析是利用物質受光激發後放出的螢光進行定性或定量。在適當的低濃度範圍、固定測定條件下，螢光強度可與待測物濃度建立關係。不是所有待測物都必須原本就具有螢光；缺乏足夠螢光的物質，可透過衍生化或錯合反應轉成適合測量的形式。 分析途徑螢光來源本單元代表應用 直接螢光法待測物本身具有螢光核黃素含量測定 化學衍生化待測物經反應後產生可測螢光長葉毛地黃苷錠溶離液經強酸、雙氧水處理 螢光錯合物法金屬與配位試劑形成具螢光的錯合物鋁與8-hydroxyquinoline形成錯合物 螢光法具有高靈敏度，適用於微量不純物分析。肽類藥物也可依其結構，利用本身的螢光（如含色胺酸、酪胺酸殘基）或適當的衍生化方法進行定量，並可應用於製劑安定性的評估。因此「螢光法不適於肽類定量、不適於安定性檢測、不適於微量不純物分析」都是錯誤敘述；「可透過衍生化檢測血液透析液之鋁（III）含量」則是正確敘述。 二、微量鋁：以8-羥基喹啉形成螢光錯合物 注射用水與血液透析液中的微量鋁屬於製劑雜質檢查，可利用8-hydroxyquinoline與Al³⁺形成螢光錯合物，再測定螢光強度。8-羥基喹啉又稱oxine，其環上的氮與酚性氧可同時配位，與鋁螯合。此類分析測量的是錯合物的螢光，不是游離鋁離子本身的螢光。 考題選項有時將此試劑寫成「8-hydroxyquinolone」。嚴格來說quinolone與quinoline是不同結構名稱，但在本單元題目中，它指的就是測鋁用的8-羥基喹啉，看到時應直接選它。 試劑或物質辨識重點 8-hydroxyquinoline（8-hydroxyquinolone）微量鋁螢光錯合分析的關鍵試劑。 EDTA雖為常用螯合劑，多用於錯合滴定；「能螯合」不等於「能產生本方法所需的螢光錯合物」。 Fluorescein本身是螢光染料，但不是測鋁所用的螯合試劑。 Dithizone常與重金屬（如鉛）形成有色錯合物，屬比色法試劑，不是本方法答案。 Chlorphenamine、acetylacetone均非鋁螢光錯合方法的指定試劑。 當題目已指定加入8-羥基喹啉形成鋁錯合物，並問以何種方法測定感度最高時，應選螢光光譜法，而非可視光度法、原子吸收光譜法或紅外光光譜法。這是針對該錯合反應的判斷，不宜擴大成「螢光法在所有金屬分析中都比原子吸收法靈敏」。 三、長葉毛地黃苷錠：先衍生化，再測溶離量 長葉毛地黃苷（digoxin）錠的溶離試驗，以螢光分析法測定釋出的主成分。取出溶離液後，須以強酸和雙氧水（過氧化氫）處理，使待測成分轉為具螢光的反應產物，再測定螢光度並與標準品比較求得含量。 作答時要連結「溶離取樣→強酸＋雙氧水前處理→測定螢光→換算溶離量」。這裡不是利用鋁離子與藥物形成螢光錯合物；「與鋁離子形成錯合物後分析」是把微量鋁分析的觀念張冠李戴。 其溶離合格標準為1小時內主成分釋放不得少於80%，時間與百分比須成對記憶。 四、核黃素：以還原前後的螢光差值排除背景 核黃素（riboflavin，維生素B₂）本身具有強螢光，其含量測定（如中華藥典第五版所載方法）採用螢光分光儀。核黃素雖也能吸收紫外光與可見光，但題目問含量測定儀器時，答案是螢光分光儀，而非旋光計、紅外線光譜儀或紫外光／可視光光譜儀。 樣品中的雜質可能也有螢光，因此初次讀值不一定完全來自核黃素。分析流程如下： 先測總螢光：包含核黃素螢光與雜質等背景螢光。 最後加入低亞硫酸鈉：將核黃素還原為無螢光的還原態，使其螢光消失（即破壞核黃素之螢光）。 再測殘餘螢光：此讀值即為雜質等背景的螢光。 以前後差值定量：總螢光減去還原後背景，得到核黃素的淨螢光，再與標準品比較。 核黃素淨螢光＝還原前總螢光－還原後背景螢光。 試劑名稱務必分清：sodium hydrosulfite是低亞硫酸鈉，又稱連二亞硫酸鈉，化學式Na₂S₂O₄。易混淆的sodium bisulfite是亞硫酸氫鈉（NaHSO₃），sodium thiosulfate是硫代硫酸鈉（Na₂S₂O₃）；ascorbic acid（維生素C）、sodium oxalate（草酸鈉）也都不是本方法所用的還原試劑。 常考陷阱 「螢光法不適合肽類、安定性或微量不純物分析」：一概否定的敘述不正確；螢光法靈敏度高，可透過本身螢光或衍生化應用於這些分析。 「凡是螯合劑都能用來測鋁螢光」：錯在忽略螢光錯合物的形成。測鋁抓住8-hydroxyquinoline，不能看到EDTA會螯合就選它。 「螢光染料本身會發光，所以可作為測鋁試劑」：fluorescein自身有螢光，但不是與鋁形成螢光錯合物的試劑。 「8-hydroxyquinolone拼法不同所以不選」：本單元題目中它就是測鋁試劑，應選。 「加了8-羥基喹啉後用原子吸收法或可視光度法感度最高」：錯，形成的是螢光錯合物，以螢光光譜法感度最高。 「長葉毛地黃苷溶離液加鋁離子形成錯合物後測定」：錯誤敘述；正確前處理是強酸與雙氧水，主成分以螢光法定量、1小時內不得少於80%。 「低亞硫酸鈉用來產生核黃素螢光或作為呈色劑」：作用方向相反；它將核黃素還原，破壞其螢光。 「加入低亞硫酸鈉是為了防止核黃素氧化」：雖然它是還原劑，此步驟的目的是消除核黃素螢光以測得雜質背景。 「還原核黃素用硫代硫酸鈉、維生素C或草酸鈉」：錯，指定試劑為sodium hydrosulfite。 「核黃素含量用UV/Vis光譜儀測定」：題目所問的含量測定答案是螢光分光儀。 記憶口訣 「鋁找八羥喹，地黃酸氧催；B₂先總後還原，前減後值才算對。」八羥喹：8-羥基喹啉與鋁形成螢光錯合物；酸氧：長葉毛地黃苷溶離液以強酸與雙氧水處理；還原：低亞硫酸鈉破壞核黃素螢光，總螢光減背景即為核黃素。