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學習重點 抗凝劑會影響酵素活性：EDTA可螯合金屬離子，因此EDTA血漿不適合測定鹼性磷酸酶（ALP）活性。 溶血干擾不只來自目標酵素釋出：還包括其他酵素參與測定反應及血紅素干擾。不能因紅血球缺乏CK，就認定溶血不影響CK結果。 保存方式須依酵素選擇：LDH具有低溫不穩定的特性，不能把冷藏或冷凍視為所有酵素的通用保存方法。 室溫穩定性要看比較對象：AST、ALT、LDH、ACP之中，ACP活性下降最快；Amylase、CK、ALP、AST之中，則以CK下降最快。 活性測定須維持適當反應條件：了解IU的定義、競爭性抑制及受質耗盡後的稀釋重測原則。 核心觀念 一、檢體採集與抗凝劑選擇 血清是血液凝固後分離的液體；血漿則由加入抗凝劑的血液分離取得。酵素檢驗能否使用血漿，必須確認抗凝劑與測定方法是否相容，不能認為血清與各種血漿均可互換。 ALP需要鋅、鎂等金屬離子維持活性。EDTA會螯合金屬離子，使ALP測得活性偏低，因此不適合使用EDTA血漿測定ALP。肝素血漿是否適用，應依檢驗方法確認。 採血時應避免造成溶血，並於適當凝固後儘速分離血清，減少血球持續接觸與細胞內成分釋出的影響。延遲測定時，應依目標酵素的穩定性選擇保存條件，不能一律冷藏或冷凍。 二、溶血干擾的三種來源 細胞內目標酵素釋出：紅血球內含量較高的酵素進入血清，可使結果假性升高，典型代表為LDH與AST。 其他細胞內酵素干擾測定反應：即使紅血球缺乏待測酵素，釋出的其他酵素仍可能干擾分析，CK測定就是重要例子。 血紅素造成分析干擾：可能影響吸光或反應系統，干擾方向與程度取決於測定方法。 酵素溶血時的判讀重點 LDH，乳酸脫氫酶紅血球內含量高，溶血可造成明顯假性升高。 AST，天門冬胺酸轉胺酶紅血球內含有AST，溶血可使結果升高。 ALT，丙胺酸轉胺酶也可能受溶血影響，程度通常較LDH、AST小。 GGT，γ-麩胺醯轉移酶在LDH、AST、GGT、ALT的比較中，受溶血影響最小。 CK，肌酸激酶溶血釋出的腺苷酸激酶可干擾部分CK測定法，造成假性升高。 CK的關鍵是「沒有目標酵素，也可能有分析干擾」。紅血球缺乏CK，不能據此推論嚴重溶血不影響CK。腺苷酸激酶可由ADP產生ATP，干擾利用ATP進行的CK偶聯反應；實際影響程度與試劑抑制此干擾的能力有關。 三、LDH：低溫保存的例外 LDH不能套用「不能立即測定就放4℃」的通則。部分LDH同功酶具有低溫不穩定性，尤其LDH4、LDH5較容易因低溫而失活，使總活性降低，並可能改變同功酶分布。 因此，本單元的保存判斷應掌握：LDH延遲測定時，不宜直接以4℃冷藏作為通則；也不能認定在4℃可穩定維持三天。短暫延遲時，以室溫保存並儘速分析的概念作判斷，實際可接受時間仍須依方法規範確認。 血清在－20℃儲存24小時後，不適合用來測定LDH活性。在ALP、AST、LDH、Lipase的比較中，應辨認出LDH的低溫不穩定性；避免把「冷凍能保存檢體」直接等同於「冷凍能維持所有酵素活性」。 四、室溫活性下降：ACP與CK要分組記憶 比較範圍室溫活性下降最快者判斷關鍵 AST、ALT、LDH、ACPACP，酸性磷酸酶ACP不穩定，應儘速處理與測定。 Amylase、CK、ALP、ASTCK，肌酸激酶相較於同組酵素，CK在室溫較容易失活。 ACP的活性容易隨保存而下降，不能認定一般血清只要放在4℃，就能維持48小時。ACP穩定性也受pH影響，必要時須依檢驗規範進行酸化等穩定處理，不能自行套用固定保存期限。 CK活性與酵素結構中巰基的狀態有關，保存過程中的氧化可能使活性降低。檢體應及時分離、測定；若需保存，須採用適合CK的方法。兩組室溫比較只能支持各組內的相對判斷，不能據此推導所有酵素的完整穩定性排名。 五、酵素活性單位與反應判讀 國際單位IU：在特定測定條件下，每分鐘可催化1 μmol受質轉換的酵素量；在相應反應計量關係下，也可用每分鐘產生1 μmol產物表示。IU代表催化能力，並非酵素的重量；溫度、pH及受質濃度等條件會影響測得活性。 典型競爭性抑制：抑制物與受質競爭酵素的活性部位。提高受質濃度可減輕抑制；其典型動力學表現為表觀Km增加、Vmax不變。 受質耗盡：檢體酵素活性過高時，受質可能快速消耗，反應不再維持線性，導致測得活性偏低。此時可使用方法允許的稀釋液稀釋檢體，再重新測定，並將結果乘回稀釋倍數。 常考陷阱 「EDTA血漿可直接測ALP」：錯在忽略金屬離子螯合造成的活性抑制。 「紅血球沒有CK，所以嚴重溶血不影響CK」：推論錯誤。腺苷酸激酶等成分仍可干擾CK分析。 「溶血對GGT完全沒有影響」：應記為指定比較中影響最小，不宜擴大成所有方法均完全不受干擾。 「LDH不能立即測定就應放4℃」：忽略LDH的低溫不穩定性；也不能認定4℃可穩定維持三天。 「－20℃保存24小時適合所有酵素」：LDH是本單元必須辨識的例外。 「ACP在4℃一定能維持48小時」：未交代穩定處理與方法條件，不能如此判定。 「室溫下降最快永遠選同一種酵素」：要先看比較組合，分別掌握ACP與CK。 「受質耗盡代表活性低，無須重測」：可能正是活性過高造成的假性偏低，應適當稀釋後重測。 記憶口訣 「EDTA抓金屬，ALP活性受阻；溶血升LDH、AST，CK另有腺激酶。」 「乳脫怕低溫，保存別通用；室溫分組看，酸磷與肌激。」