學習重點 離心時,血液成分依比重分層:比重越低越靠上層,越高越沉向底部。由低到高為血小板<淋巴球<單核球<紅血球。 血漿是含抗凝劑全血離心後的淡黃色上清液,含纖維蛋白原(fibrinogen)。血清是血液未加抗凝劑、先凝固後所得的液體,纖維蛋白原已被消耗。 由全血製備血小板濃厚液要經兩階段離心:先一次輕度(軟)離心,再一次重度(硬)離心。 要分清 PRP、PPP、血小板濃厚液、新鮮冷凍血漿(FFP)、冷凍血漿與冷凍沉澱品各自的來源與製程。 洗滌的主要作用是去除血漿。大量移除白血球則靠白血球過濾器(可移除 99% 以上)。 核心觀念 一、血液成分的比重與離心分層 離心時,各成分依比重及沉降速度形成不同層次。比重越低越留在上層,比重越高越沉到底部。常考的排序由低到高為: 血漿<血小板<淋巴球<單核球<(顆粒球)<紅血球 血液成分比重相對位置判斷重點 血小板細胞成分中最低輕度離心後仍大多懸浮在上層血漿中,因此能得到富含血小板血漿(PRP)。 淋巴球高於血小板屬單核細胞(mononuclear cell)。 單核球高於淋巴球體積較大,比重卻不一定較低,不能用大小推比重。 紅血球最高沉在最底層。 密度梯度離心是利用已知密度的分離液(如 Ficoll-Hypaque,密度約 1.077 g/mL)分離血球。離心後,比重較低的單核細胞(淋巴球、單核球)停留在血漿與分離液的交界面;比重較高的顆粒球與紅血球則穿過分離液沉到底部。這是分離周邊血單核細胞的常用方法。 血庫日常製備血品不用分離液,而是靠不同離心力與時間(輕度/重度離心),讓不同成分沉降或留在上層。 二、離心後分層與血漿/血清的區別 含抗凝劑的全血充分離心後,由上而下分三層: 上層:淡黃色上清液,即血漿(plasma)。因有抗凝劑,血液未凝固,所以保留纖維蛋白原及凝血因子。 中間:buffy coat(白膜層)。由白血球與血小板組成,是一層薄薄的灰白色細胞層,不是上清液。 下層:紅血球。 血清(serum)的製法不同:血液不加抗凝劑,讓它先凝固,再離心或移除血塊後取上清液。凝固過程中纖維蛋白原轉變為纖維蛋白並形成血塊,所以血清不含纖維蛋白原,部分凝血因子也被消耗。 比較項目血漿(plasma)血清(serum) 抗凝劑有無 製備方式抗凝全血直接離心,吸取上清液血液先凝固,再取血塊以外的液體 外觀淡黃色淡黃色 纖維蛋白原含有不含(凝固時已消耗) 凝血因子大致保留部分被消耗 判斷原則:題目只要寫到「注入含抗凝劑試管、混合後離心」,例如 2,000 g 離心 15 分鐘,吸出的上清液就是淡黃色的血漿。不會是血清,也不是 buffy coat。 三、全血製備血小板濃厚液(兩段式離心) 第一次輕度(軟)離心:紅血球(及大部分白血球)沉降,全血分成上層的富含血小板血漿(PRP)與下層的紅血球濃厚液。 第二次重度(硬)離心:將 PRP 以高離心力、較長時間離心,使血小板沉澱。底部的沉澱物以少量血漿懸浮,即為血小板濃厚液。上層液體則是乏血小板血漿(PPP)。 口訣是「一次輕度離心,再一次重度離心」。順序不能顛倒,也不是兩次輕度或兩次重度。 「200 ×g、3 分鐘」屬於低離心力、短時間的條件,無法讓血小板沉澱分出血小板濃厚液。要把 PRP 分成血小板濃厚液與 PPP,必須用重度離心。 四、新鮮冷凍血漿、冷凍血漿與冷凍沉澱品 新鮮冷凍血漿(FFP)的關鍵是在採血後短時間內分離並冷凍,以保存不穩定的凝血因子(第 V、VIII 因子)。教科書常見標準為採血後 8 小時內,「24 小時內冷凍」並不符合 FFP 的定義。冷凍時間較晚的血漿,或 FFP 超過效期者,則歸為冷凍血漿,所含不穩定凝血因子較少。 FFP 的血漿來源是全血離心後分出的血漿,例如 PRP 再經重度離心所得的 PPP,在規定時間內冷凍即可製成 FFP。血小板濃厚液是最終產品,不會再離心分出 FFP 或冷凍血漿。 冷凍沉澱品的製法:將 FFP 在冷藏溫度(約 1~6°C)下緩慢解凍,部分高分子量蛋白會形成不溶的白色沉澱。離心後移除上清液,將少量沉澱物再冷凍保存。此產品稱為冷凍沉澱第八凝血因子(cryoprecipitate),可在少量體積中收集約 50% 的纖維蛋白原及第 VIII 凝血因子。除第 VIII 因子外,它也含纖維蛋白原、von Willebrand 因子、第 XIII 因子及纖維黏連蛋白(fibronectin)。 五、洗滌與白血球過濾 處理方式主要效果重點 洗滌(以生理食鹽水反覆洗滌紅血球)去除絕大部分血漿(血漿蛋白、抗體等),也能減少部分白血球與血小板主要目的就是去除血漿,可預防對血漿蛋白過敏的輸血反應(如 IgA 缺乏者)。 白血球過濾器可移除 99% 以上白血球減少白血球是過濾器的專長,效果遠優於洗滌。 「洗滌無法去除血漿」是錯誤敘述,因為去除血漿正是洗滌的核心功能。 常考陷阱 用體積大小推比重:單核球比淋巴球大,比重卻較高。正確順序是血小板<淋巴球<單核球<紅血球,紅血球一定最重。 看到「淡黃色上清液」就選 serum:血漿與血清都是淡黃色,判斷關鍵在有無抗凝劑。有抗凝劑就是 plasma。 「缺乏 fibrinogen」配上抗凝全血:只有血清缺乏纖維蛋白原。抗凝全血的上清液是血漿,含纖維蛋白原。 把 buffy coat 當成上清液:buffy coat 是位於血漿與紅血球之間的白血球及血小板層,不是吸出的上清液。 離心順序或次數寫錯:「兩次輕度」、「先重度再輕度」、「一次輕度再兩次重度」都錯,正確是一輕一重。 低離心力條件冒充重度離心:200 ×g、3 分鐘無法沉澱血小板,不能把 PRP 分成血小板濃厚液與 PPP。 全血輕度離心的產物:得到的是 PRP 與紅血球濃厚液(正確敘述),不是直接得到血小板濃厚液。 「24 小時內冷凍」即為 FFP:錯誤,FFP 須在採血後短時間內(常見標準 8 小時內)冷凍。 血小板濃厚液再離心分出 FFP:錯誤,FFP 的血漿來自全血或 PRP 離心後的血漿(PPP),不是來自血小板濃厚液。 洗滌與過濾混淆:洗滌主要去除血漿;移除 99% 白血球是白血球過濾器的效果。「洗滌無法去除血漿」必錯。 冷凍沉澱品的製程:FFP 在冷藏溫度下緩慢解凍,收集沉澱(約 50% 纖維蛋白原與第 VIII 因子),產品稱冷凍沉澱第八凝血因子,以上皆為正確敘述,不要誤判為錯。 記憶口訣 比重排序:「小板浮最上,淋巴單核排中間,紅球沉到底。」 血漿血清:「抗凝不凝是血漿,留住纖維蛋白原;不抗凝先凝是血清,纖維蛋白原用光光。」 血小板製備:「先輕後重各一次:輕分 PRP,重沉血小板。」 洗滌與過濾:「洗滌洗血漿,過濾濾白球。」