阿摩線上測驗
登入
阿摩線上測驗
登入
學習重點 普魯士藍鐵染色即 Perls’ stain（Prussian blue stain、iron stain），是骨髓鐵染色的標準方法，用來顯示骨髓巨噬細胞內的儲存鐵及紅血球母細胞內的鐵粒（siderotic granules）。 Perls reaction 在酸性條件（鹽酸）下進行，讓鐵與 potassium ferrocyanide（亞鐵氰化鉀）反應，產生藍色的普魯士藍；顯微鏡下可見的染色對象主要是 hemosiderin。常用背景複染劑為番紅（safranin）。 缺鐵性貧血的骨髓鐵染色為：巨噬細胞貯鐵減少，幼紅細胞鐵粒也減少。 環狀鐵粒芽細胞（ring sideroblast）只能靠鐵染色觀察。判讀時要看鐵粒的數量，也要看鐵粒是否環繞細胞核排列，不能只看有沒有鐵。 骨髓異形成症候群中，區別 refractory anemia（RA）與 refractory anemia with ring sideroblasts（RARS），要靠 Perls’ iron stain 計數環狀鐵粒芽細胞。 核心觀念 一、Perls’ reaction 的原理 普魯士藍染色偵測的是非血紅素鐵，也就是儲存形式的鐵。血紅素中的鐵與紫質緊密結合，不會呈陽性，所以成熟紅血球的血紅素不會被染藍。 反應流程： 鹽酸處理，使與蛋白結合的三價鐵（Fe³⁺）釋出 → Fe³⁺ 與 potassium ferrocyanide 結合 → 形成不溶性的 ferric ferrocyanide（普魯士藍），含鐵處呈藍色顆粒 需要特別區分： 把鐵染成藍色的反應試劑是 potassium ferrocyanide。methylene blue、brilliant cresyl blue 雖然名稱有「blue」，但它們是其他染色用的染料，不參與普魯士藍反應。 藍色鐵粒在背景襯托下才容易判讀，所以要再加背景複染（counter stain）。常用的複染劑是 safranin（番紅），它把細胞核與背景染成紅色，與藍色鐵粒形成對比。 二、骨髓鐵染色的檢體與染色選擇 評估骨髓鐵時，應取含骨髓顆粒（marrow particles）的骨髓抽吸抹片作 Perls’ stain，因為儲存鐵大多位於顆粒中的巨噬細胞。其他常見染色都不能用來評估鐵： Liu’s stain、Wright’s stain：屬 Romanowsky 類例行形態染色，用來看細胞形態，不能特異地顯示儲存鐵，也無法看出 ring sideroblast。 H&E stain：屬組織切片的一般染色，不是骨髓鐵評估的標準方法。 Supravital stain（如 new methylene blue、brilliant cresyl blue）：活體染色，用於網狀紅血球計數、Heinz body 等，不是鐵染色。 三、Perls’ stain 可觀察到的鐵形式 成分性質與 Perls 染色的關係 Hemosiderin不溶性、聚集的儲存鐵複合物呈明顯藍色顆粒，可在光學顯微鏡下直接觀察，是骨髓鐵染色的主要判讀對象 Ferritin可溶性的鐵儲存蛋白分散在細胞內，光學顯微鏡下通常看不到明確的藍色顆粒 Apoferritin未結合鐵的 ferritin 蛋白殼不含鐵，不會呈陽性 Transferrin血漿中運輸鐵的蛋白存在於血漿，不是骨髓抹片中可觀察的儲存鐵 四、骨髓鐵的判讀：兩個觀察位置 巨噬細胞內的貯鐵量：代表骨髓儲存鐵池（hemosiderin），通常以分級方式評估，例如 0～4+ 或 0～6 級。 紅血球母細胞內的 siderotic granules：含少量鐵粒的幼紅細胞稱為 sideroblast（鐵粒芽細胞）。正常骨髓中約有 20%～50% 的幼紅細胞可見 1～數顆散在的細小鐵粒，代表鐵正送往血紅素合成。 臨床情況巨噬細胞貯鐵幼紅細胞鐵粒判讀重點 正常存在（適量）正常，少量散在鐵粒鐵的儲存與利用都正常 缺鐵性貧血減少或缺乏減少或缺乏儲存鐵耗竭，幼紅細胞也拿不到鐵；骨髓鐵缺乏是缺鐵最直接的證據 慢性疾病貧血正常或增加減少鐵被「鎖」在巨噬細胞內，無法釋出給幼紅細胞利用 鐵過量（如反覆輸血、血色素沉著症）增加可增加大量含鐵巨噬細胞 鐵粒芽細胞性貧血／伴環狀鐵粒芽細胞的 MDS常增加增加，且呈環核分布關鍵在出現 ring sideroblast，而不是總鐵量多 缺鐵性貧血的選項，凡是寫「貯鐵正常」或「貯鐵上升」都是錯的，正確組合是兩者皆減少。 五、環狀鐵粒芽細胞（ring sideroblast） Ring sideroblast 是血紅素合成障礙造成的：鐵無法順利併入紫質，於是堆積在幼紅細胞的粒線體內。幼紅細胞的粒線體分布在細胞核周圍，所以鐵粒會沿核周排成環狀或半環狀。 WHO 的形態學定義為： 幼紅細胞內至少有 5 顆鐵粒； 鐵粒環繞細胞核至少達核周長的 1/3。 Ring sideroblast 在一般 Wright/Liu 染色下看不出來，必須用 iron stain（Perls’ / Prussian blue stain）才能觀察。其他細胞化學染色用途不同，無法取代鐵染色： 染色主要用途 Perls’ / Prussian blue（iron stain）儲存鐵、sideroblast、ring sideroblast Myeloperoxidase（MPO）顆粒球系細胞陽性，用於區分 AML 與 ALL Sudan black B染顆粒球、單核球顆粒中的脂質，用途與 MPO 類似 α-naphthyl acetate esterase（非特異性酯酶）單核球系細胞陽性 PAS肝醣，常見於部分 ALL 及紅血球白血病的幼紅細胞 Acid phosphatase（TRAP）Hairy cell leukemia 呈抗酒石酸陽性 Leukocyte alkaline phosphatase（LAP）CML（降低）與類白血病反應（升高）的鑑別 六、RA 與 RARS 的鑑別 在傳統 MDS 分類中，RA 與 RARS 都以貧血與紅血球系的發育異常為主，在一般形態染色下不易區分。兩者的差別在於是否有一定比例的 ring sideroblast：傳統標準為 ring sideroblast 占幼紅細胞的 15% 以上，才歸為 RARS。所以必須作 iron stain（Perls’ stain）計數。MPO、Sudan black B、esterase、PAS 都無法完成這項鑑別。新版分類已改用「MDS with ring sideroblasts」等名稱，但國考仍常沿用 RA／RARS 的說法。 常考陷阱 染色名稱與反應試劑混淆：問「染色法」時答 Perls’ / Prussian blue / iron stain；問「將鐵染成藍色的試劑」時答 potassium ferrocyanide。看到 methylene blue、brilliant cresyl blue 等名稱裡有「blue」的選項，不要誤選。 主染劑與複染劑混淆：鐵染色的背景複染劑是 safranin。methylene blue、hematoxylin、brilliant cresyl blue 都不是標準答案。 誤選例行染色作骨髓鐵染色：Liu’s、Wright’s、H&E、supravital stain 都不能特異地評估儲存鐵。 Perls 染的鐵形式：顯微鏡下可見的藍色顆粒是 hemosiderin。transferrin 在血漿中，ferritin 是可溶性的、看不到明顯顆粒，apoferritin 根本不含鐵。 缺鐵性貧血的鐵染色：巨噬細胞貯鐵與幼紅細胞鐵粒「都減少」。只要選項寫貯鐵正常或上升，就是錯的。若是「貯鐵增加、鐵粒減少」，要想到慢性疾病貧血。 Ring sideroblast 的觀察方法：只能用 iron stain。Sudan black B、MPO、PAS、acid phosphatase、LAP、esterase 都是干擾選項。 有鐵粒不等於環狀：正常 sideroblast 的鐵粒少而散在；ring sideroblast 需有 ≥5 顆鐵粒，且環繞 ≥1/3 核周。 RA 與 RARS 的鑑別：要靠 iron stain 計數 ring sideroblast，不是靠 MPO、Sudan black B 或 PAS。 記憶口訣 「酸放鐵，亞鐵氰化鉀變藍；番紅來襯底，看的是血鐵素。」（血鐵素即 hemosiderin） 「缺鐵兩頭空：巨噬少、幼紅也少。」 「五顆三分一，環核叫 ring；RA 要變 RARS，只靠 Perls 鐵染色。」