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學習重點 區分直接抗球蛋白試驗（DAT）與間接抗球蛋白試驗（IAT）的檢體與原理，並判斷各種技術與檢體因素造成的是偽陽性還是偽陰性。 掌握 Coombs control cells（check cells）的血型（O 型、Rh 陽性）、用途，以及檢測 AHG 試劑時至少應達 2＋ 凝集的品管標準。 比較凝膠管柱法（gel test）與傳統試管法在洗滌、離心、結果保存及 Coombs control cells 使用上的差異，並與 SPRCA、PEG、酵素連結抗球蛋白試驗區分。 了解血庫自動化的優點（批次處理、標準化、減少人為誤差）與限制。考題的觀點是：自動化不以「使用較少量檢體」為特點。 核心觀念 一、DAT 與 IAT 的基本差異 DAT直接以病人自己的紅血球加入抗人類球蛋白（AHG）試劑，用來偵測紅血球在體內是否已被 IgG 或補體包覆，用於新生兒溶血症、輸血反應及自體免疫性溶血性貧血的檢查。 IAT先讓病人血清（血漿）與試劑紅血球在 37°C 下反應，再洗滌並加入 AHG 試劑，用來偵測血清中的不規則抗體。抗體篩檢、抗體鑑定與交叉試驗都屬於這一類。 比較項目DATIAT 檢體病人紅血球（建議用 EDTA 抗凝檢體）病人血清或血漿＋試劑紅血球 偵測對象體內已致敏於紅血球上的 IgG 或補體血清中的游離抗體（體外致敏） 37°C 孵育不需要需要 二、偽陽性的原因 偽陽性指的是紅血球實際上沒有被免疫性抗體或補體包覆，卻出現凝集。常見原因如下： 自體冷型抗體（冷凝集素）：檢體在低溫下產生凝集，或冷抗體在體外使補體結合到紅血球上。DAT 與 IAT 都可能因此出現偽陽性。 體外補體活化：凝固檢體冷藏保存，或使用含矽膠的採血管，都可能使補體（特別是 C4、C3）在體外結合到紅血球上，與多特異性 AHG 反應而呈陽性。 器材與試劑污染：試管骯髒（灰塵、清潔劑殘留）、AHG 試劑或食鹽水受細菌污染，都可能造成非特異性凝集。 離心過度：紅血球扣壓過緊，不易打散，容易被誤判為凝集。 檢體未完全凝固就分離血清：血清中殘留纖維蛋白，析出的纖維蛋白絲可能被誤認為凝集。 溫型自體抗體：會與所有試劑紅血球反應，使 IAT 出現泛反應性陽性。 EDTA 不會造成 DAT 偽陽性。EDTA 會螯合鈣、鎂離子，阻止補體在體外被活化，因此 DAT 反而建議使用 EDTA 抗凝檢體，以排除體外補體結合的干擾。 紅血球懸浮液過濃不是偽陽性的原因。懸浮液過濃時，紅血球數量相對過多，弱凝集容易被大量未凝集的紅血球掩蓋，結果傾向於反應減弱或判讀困難，而不是假性凝集。 三、偽陰性的原因 偽陰性指的是紅血球上確實有抗體或補體，結果卻判為陰性。常見原因如下： 洗滌不足、殘餘血清未洗淨：這是最典型的原因。殘留的游離球蛋白會先中和 AHG 試劑，使試劑無法與紅血球上的抗體結合。 未加入 AHG 試劑，或 AHG 試劑失效、效價不足。 離心不足：凝集未能充分形成，弱陽性被判為陰性。 洗滌中斷或延遲加入 AHG：結合在紅血球上的抗體可能解離。 孵育溫度或時間不當、血清與紅血球比例不當。 考題常把「過度清洗紅血球」放在偽陽性或偽陰性的選項中當作干擾項。偽陰性的標準答案是「未將殘餘血清洗淨」。過度清洗不會造成偽陽性。 四、Coombs control cells（check cells） 製備：用 O 型、Rh 陽性（D＋）紅血球，以 IgG anti-D 致敏而成。 用途：試管法 AHG 試驗結果為陰性時，加入 check cells 後應出現凝集。這可以證明 AHG 試劑確實已加入、仍具活性，而且洗滌充分、未被殘餘血清中和。若加入後仍不凝集，該陰性結果無效，必須重做。 效價標準：用 Coombs control cells 測試 AHG 試劑時，至少應呈現 2＋ 凝集。 五、凝膠管柱法與傳統試管法 凝膠管柱法（gel test，又稱 micro-column test）把 AHG 試劑預先混入凝膠管柱中。紅血球與血清反應後直接離心，血清密度較低，會留在凝膠上方，紅血球則進入凝膠，等於在離心時同時完成了分離。因此它不需要洗滌，也不會有殘餘血清中和 AHG 的問題，最後不需要加入 IgG 被覆紅血球（check cells）。判讀方式：凝集塊停留在凝膠上層或中段為陽性，紅血球全部沉到管底為陰性。 項目凝膠管柱法傳統試管法 AHG 期前洗滌不需要需要，以食鹽水洗 3～4 次 離心需要需要 結果保存凝集位置固定，結果可保存一至兩天仍可判讀，也方便複核須在離心後立即判讀，無法保存 Coombs control cells不需要陰性者須加入確認 標準化較高，判讀一致性佳較依賴操作者的打散與判讀技巧 六、其他抗體檢驗方法與凝膠法的比較 方法AHG 期前是否需洗滌是否需加 check cells Gel test不需要不需要 SPRCA（固相紅血球吸附法）需要，須洗去未結合的血漿不需要，因為指示紅血球本身就是 anti-IgG 致敏紅血球 PEG 技術需要需要，與試管法相同 Enzyme-linked antiglobulin test需要依酵素呈色判讀，不以 check cells 確認 四種方法中，只有 gel test 同時符合「不需洗滌」與「不需加 IgG 被覆紅血球」兩個條件。 七、血庫自動化作業 優點： 可批次處理，同時檢驗、判讀大量檢體。 加樣、孵育、離心與判讀條件固定，操作更標準化。 條碼辨識、自動判讀與資料直接傳輸，可減少人為誤差，例如檢體轉位、抄寫錯誤或判讀主觀差異。 結果可追溯，便於品管。 限制： 儀器與試劑成本高，需要定期維護與校正。 儀器故障時須有人工備援。 異常或弱反應仍需人員複核。 儀器上機多使用原始採血管，並需保留取樣的無效體積（dead volume），因此「使用較少量檢體」不是血庫自動化的特點。 常考陷阱 「紅血球懸浮液過濃」造成 DAT 偽陽性：錯。過濃會掩蓋弱凝集，傾向反應減弱或判讀困難。冷抗體、矽膠管、C4 結合則都是偽陽性的原因。 「含 EDTA 的血漿」造成偽陽性：錯。EDTA 能抑制體外補體活化，是 DAT 的建議檢體。低溫凝集檢體、試管骯髒、AHG 遭細菌污染則都會造成偽陽性。 判斷偽陽性或偽陰性的方向： 洗不淨 → 偽陰性 未加 AHG → 偽陰性 離心不足 → 偽陰性 離心過度 → 偽陽性 冷或溫型自體抗體 → 偽陽性 血液未完全凝固就分離血清 → 纖維蛋白干擾，偽陽性 「過度清洗紅血球」：不是偽陽性的原因，也不是偽陰性的標準答案。偽陰性要選「未將殘餘血清洗淨」。 Coombs control cells 的血型：是 O 型 Rh（＋），不是 Rh（－）。必須帶有 D 抗原，才能被 IgG anti-D 致敏。 AHG 效價標準：至少 2＋，不是 1＋。 「gel test 與試管法陰性者均須加 Coombs control cells」：錯。只有試管法需要。另外，gel test 仍需要離心，結果可保存一至兩天。 「不洗滌＋不加 check cells」：只有 gel test 符合。SPRCA 需要洗滌，PEG 需要洗滌也需要 check cells。 「自動化使用較少量檢體」：這是錯誤敘述。批次判讀、標準化、減少人為誤差才是自動化的特點。 記憶口訣 「冷、矽、C4、髒、菌：偽陽性；洗不淨、沒加、轉不夠：偽陰性。」 「Check cell：O 正 IgG，至少兩個加。」 「凝膠三不一要：不洗、不加 check cell、不必馬上判，但要離心。」 「自動化：多、準、少錯，不省血。」