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學習重點 沖出（洗出）試驗檢測的是紅血球上附著的抗體，不是血漿中游離的抗體，也不是直接檢測抗原。把抗體從紅血球上解離下來後，再鑑定其專一性。 吸附沖出試驗的用途是偵測表現量很少的弱抗原，例如ABO亞型（Ax、Am、Ael等）、Del，以及紅血球表面抗原數目過少、直接凝集看不出來的情況。孟買血型不是靠吸附沖出來確認。 anti-A,B（O型血清）不等於anti-A加anti-B。其中有一種交叉反應抗體，可辨識A與B的共同結構。因此B型紅血球吸附後的沖出液，對A cells、B cells都呈陽性，對O cells呈陰性。 影響沖出敏感度的操作重點：用冷（4°C）食鹽水清洗，以減少抗體脫落；清洗要充分，以去除游離抗體；殘留有機溶劑會干擾後續試驗；沖出液不穩定，應盡快測試。 核心觀念 一、沖出試驗與吸附沖出試驗的原理 沖出試驗（elution test）是用物理或化學方法，使結合在紅血球表面的抗體解離，收集含抗體的液體，稱為沖出液（eluate）。再以沖出液與已知抗原的紅血球反應，就能知道原本附著在紅血球上的是什麼抗體。臨床上常用於直接抗球蛋白試驗（DAT）陽性的情況，例如新生兒溶血症、自體免疫溶血、輸血反應，用來鑑定紅血球上抗體的專一性。 吸附沖出試驗（absorption-elution test）的步驟如下： 吸附：將待測紅血球與已知專一性的抗體試劑一起作用，若紅血球上有對應抗原，即使數量很少，也能結合抗體。 清洗：徹底洗去未結合的游離抗體，確認最後一次洗液不含抗體。 沖出：把結合在紅血球上的抗體解離下來。 鑑定：以沖出液與已知血型紅血球反應。若沖出液含有預期專一性的抗體，就證明待測紅血球上帶有該抗原。 重點在於：抗原太弱、直接凝集看不出來時，仍可能吸附抗體。所以這是一種「以抗體間接證明弱抗原存在」的方法。 二、吸附沖出試驗的應用與非應用 情況是否適用說明 ABO亞型（如Ax、Am、Ael）適用A或B抗原量極少，與anti-A、anti-B幾乎不凝集，但可吸附抗體，再從沖出液中沖出。 紅血球表面抗原數目過少適用這正是吸附沖出的設計目的：偵測凝集法看不到的低表現量抗原。 Del適用Del屬於RhD極弱表現型，不是A、B抗原。一般D分型及弱D（間接抗球蛋白）檢查都可能呈陰性，需以anti-D吸附、再沖出才能證實D抗原存在。 孟買血型（Oh）不用於確認孟買血型的紅血球缺乏H抗原，因此也沒有A、B抗原。確認方式是用anti-H（如Ulex europaeus凝集素）檢測紅血球不凝集，並檢出血清中具強效、廣溫度範圍的anti-H，必要時加做唾液分泌型等檢查。 三、anti-A,B吸附B型紅血球後的沖出液反應 O型人血清中的anti-A,B，除了單純的anti-A與anti-B之外，還含有一種交叉反應抗體（cross-reacting anti-A,B）。它辨識的是A、B抗原共有的構造，所以能同時與A抗原及B抗原結合，而且無法分離成anti-A與anti-B兩部分。 B型紅血球與anti-A,B作用時，被吸附到細胞上的抗體包括anti-B與交叉反應的anti-A,B。沖出後，沖出液的反應如下： 沖出液測試對象結果原因 A cells＋沖出液中的交叉反應anti-A,B可與A抗原結合。 B cells＋anti-B與anti-A,B都能與B抗原結合。 O cells0O型紅血球沒有A、B抗原，可作為陰性對照。 這個實驗正是證明「anti-A,B是一種獨立抗體，不只是anti-A與anti-B混合」的經典依據。由於anti-A,B同時辨識A與B，它也常用來偵測弱A亞型（如Ax）。 四、影響沖出試驗敏感度的因素 因素正確觀念 清洗溫度使用冷（4°C）食鹽水清洗，可減少已結合抗體在清洗過程中解離脫落，保留更多可沖出的抗體，提高敏感度。 清洗次數必須充分清洗，把游離抗體完全去除，才能保證沖出的抗體確實來自紅血球表面。應保留最後一次洗液，與沖出液一起測試；最後洗液須呈陰性。只洗1～2次通常不足，游離抗體殘留會造成假陽性。 有機溶劑殘留以乙醚、氯仿等有機溶劑沖出時，殘留溶劑可能使紅血球溶血、抗體變性，或干擾後續凝集及抗球蛋白試驗，因此必須去除乾淨。 沖出液穩定性沖出液中的抗體容易變性、不穩定，應盡快測試；若需保存，應依規範冷凍並適當處理。不能認為可長久保持安定。 常考陷阱 「洗出試驗是檢測血漿中游離抗體」或「檢測紅血球上的抗原」：錯。檢測的是紅血球上附著的抗體。血漿中游離抗體屬於抗體篩檢（間接抗球蛋白試驗）的範圍。 「吸附沖出可用於確認孟買血型」：錯。孟買血型的確認要靠anti-H試劑及血清中的anti-H；吸附沖出是用來證明弱抗原「存在」。 把Del當成A、B弱抗原：錯。Del是RhD的極弱表現型，以anti-D吸附沖出證實。 「B型紅血球只吸附anti-B，沖出液只對B cells陽性」：錯。anti-A,B含有交叉反應抗體，沖出液會使A cells、B cells都陽性，只有O cells陰性。 「沖出液對A、B、O cells全陽性」：錯。O cells沒有A、B抗原，必定是陰性。 「清洗1～2次即可保證抗體來自細胞表面」：錯。清洗次數不足會殘留游離抗體，需充分清洗，並以最後洗液陰性作為驗證。 「有機溶劑不影響血清學測試」「沖出液可長久安定」：都錯。殘留溶劑會干擾試驗或使抗體變性，沖出液也應盡快測試。 用溫或常溫食鹽水清洗：會增加抗體解離，降低敏感度。正確做法是用冷食鹽水。 記憶口訣 「沖出查的是細胞上的抗體；弱抗原靠吸附，孟買要找anti-H。」 「O血清吸B細胞，沖出A、B都陽，O細胞永遠陰。」 「冷水洗、洗乾淨、溶劑除、馬上測。」