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學習重點 DAT 檢測的是「病患紅血球在體內已被抗體或補體包覆」，用來協助診斷免疫媒介性溶血；它不檢測血清中的游離抗體，也不用於鑑定血清中的多重抗體。 DAT 陽性的經典情況是自體免疫溶血性貧血、溶血性輸血反應、新生兒溶血症及藥物（如 quinidine）引起的免疫性溶血；遺傳性球形紅血球症、G6PD 缺乏、thalassemia 屬非免疫性溶血，DAT 通常陰性。 多特異性 AHG 可同時偵測 IgG 與補體（C3d）；單特異性 anti-IgG、anti-C3d 用來分辨包覆物種類。只有補體陽性、IgG 陰性時，代表紅血球上附著的是補體。 典型冷凝抗體症候群為 anti-IgG（－）、anti-C3d（＋）、多特異性 anti-IgG/C3d（＋）；典型溫型自體免疫溶血以 anti-IgG 陽性為主。 DAT 是區分遺傳性球形紅血球症與自體免疫溶血性貧血最適合的檢驗，因為兩者都可見球形紅血球，但只有後者有免疫包覆。 核心觀念 一、DAT 的原理與檢測目的 直接抗球蛋白試驗（direct antiglobulin test，DAT；又稱直接 Coombs test）是將病患紅血球充分洗滌、去除血漿中的游離球蛋白後，直接加入抗人類球蛋白（AHG）試劑。若紅血球在體內（in vivo）已被 IgG 或補體包覆，AHG 會架橋使紅血球凝集而呈陽性。 DAT 可協助診斷：自體免疫溶血性貧血、新生兒溶血症、近日輸血引起的溶血性輸血反應，以及藥物引發的免疫性溶血。臨床上要診斷自體免疫溶血性貧血，最常用、最具代表性的檢驗就是 DAT（Coombs test）。 DAT 陽性代表紅血球帶有免疫包覆物，但不必然等於正在發生臨床上有意義的溶血；DAT 陰性也不能單獨排除所有免疫性溶血。實際判讀仍須合併網狀紅血球數、LDH、間接膽紅素、結合珠蛋白、血球型態及用藥或輸血史。 二、DAT、IAT 與洗出試驗的區別 試驗檢測對象主要用途 直接抗球蛋白試驗（DAT）病患紅血球上「體內已附著」的抗體或補體免疫性溶血、新生兒溶血症、溶血性輸血反應、藥物性溶血 間接抗球蛋白試驗（IAT）血清中的游離抗體（先與試劑紅血球於試管內致敏）抗體篩檢、抗體鑑定（含多重抗體）、交叉試驗、弱 D 檢測 洗出試驗（elution）把已附著在紅血球上的抗體釋放出來DAT 陽性後，進一步鑑定是何種抗體 要判斷「紅血球在體內是否已有抗體或補體被覆」，應選 DAT；洗出試驗是在 DAT 陽性之後才用來鑑定抗體特異性。唾液酸水解、蛋白酶處理則是改變紅血球抗原表現的處理方法，不能用來判斷紅血球是否已吸附抗體或補體。 三、多特異性與單特異性抗球蛋白試劑 試劑可辨識的成分判讀意義 多特異性 AHG（anti-IgG/C3d）IgG 與 C3d初步判斷紅血球是否帶有免疫包覆物 單特異性 anti-IgGIgG陽性表示 IgG 包覆，常見於溫型自體免疫溶血、新生兒溶血症 單特異性 anti-C3d沉積於紅血球表面的 C3d陽性表示補體包覆，常見於冷凝抗體症候群、部分藥物性溶血 判讀型態： 多特異性（＋）、anti-IgG（＋）：IgG 包覆，典型為溫型自體免疫溶血（可同時伴 C3d 陽性）。 多特異性（＋）、anti-IgG（－）、anti-C3d（＋）：只有補體包覆，紅血球上可能附著補體；典型為冷凝抗體症候群，不符合典型溫型自體免疫溶血，且仍屬免疫媒介的溶血。 全部陰性：無可偵測的免疫包覆，應考慮非免疫性溶血。 交叉試驗中多特異性陽性、anti-IgG 陰性：表示反應來自補體而非 IgG，常見於會固定補體的抗體，代表為 Lewis 抗體（多為 IgM，可活化補體）與 Kidd 抗體（雖為 IgG，但極易固定補體，IgG 量少時可能只偵測到 C3）。弱 anti-D 與 Duffy 抗體為 IgG 類抗體，反應應能由 anti-IgG 偵測，因此不符合「anti-IgG 陰性」的條件。 四、DAT 的品管：Coombs control cells Coombs control cells（check cells）是已被 IgG 致敏的紅血球。只有在 AHG 判讀結果為陰性的試管才需加入，加入後應出現凝集，以證明 AHG 試劑沒有被殘留的游離球蛋白中和、洗滌步驟正確、試劑確實有加入。判讀已為陽性的試管不需要再加，因此「所有試管都須加入 check cells」是錯誤說法。 五、常見疾病的 DAT 表現 臨床情況典型 DAT 表現機轉重點 溫型自體免疫溶血性貧血anti-IgG（＋），可伴 C3d（＋）自體 IgG 包覆紅血球，主要於脾臟被清除 冷凝抗體症候群anti-IgG（－）、anti-C3d（＋）、多特異性（＋）IgM 冷抗體在低溫時結合紅血球並固定補體；回溫後 IgM 脫離，只剩 C3d 殘留 新生兒溶血症陽性，通常 IgG（＋）母體 IgG 抗體通過胎盤，包覆胎兒紅血球 溶血性輸血反應陽性受血者抗體包覆輸入的供者紅血球 藥物（如 quinidine）引起之免疫性溶血陽性，常以補體為主藥物依賴性抗體／免疫複合物結合紅血球並活化補體 遺傳性球形紅血球症陰性膜骨架蛋白缺陷，非免疫性 G6PD 缺乏（氧化壓力下）陰性氧化傷害造成 Heinz 小體與 bite cell，非免疫性 Thalassemia陰性珠蛋白鏈合成障礙，非免疫性 TRALI不適用捐血者血漿中的抗 HLA 或抗中性球抗體活化受血者中性球，造成肺微血管損傷，非紅血球被包覆 組合題提醒：題目問「DAT 陽性的情況」並列出自體免疫性溶血、溶血性輸血反應、冷凝性疾病、新生兒溶血症時，標準答案取自體免疫性溶血、溶血性輸血反應、因母親抗體引起的新生兒溶血症這三個經典情況。冷凝性疾病的 IgM 冷抗體本身在洗滌與回溫時會脫離，DAT 測不到抗體本身，只能偵測殘留的補體，因此在這類組合題中不列入。但若題目直接給出單特異性試劑分型，冷凝抗體症候群要選 anti-IgG（－）、anti-C3d（＋）、anti-IgG/C3d（＋）。 六、DAT 在溶血病因鑑別中的角色 遺傳性球形紅血球症與自體免疫溶血性貧血都可出現球形紅血球、溶血與脾腫大，外觀上難以分辨。最適合用來區分兩者的檢驗是 DAT：前者陰性，後者陽性。滲透脆性試驗在兩者都可能異常，因此無法作為鑑別依據。 以下情況不代表紅血球已被抗體包覆，DAT 不一定陽性： 病人帶有 anti-E 等同種異體抗體：抗體存在於血清中，病人自身紅血球沒有 E 抗原就不會被包覆，應以 IAT 偵測。 Weak D 血型：屬於 D 抗原表現量弱的問題，以 IAT 檢測弱 D，與 DAT 陽性無關。 交叉試驗不配合：通常是受血者血清中的抗體與供者紅血球在試管內反應，屬 IAT 範疇，不代表病人紅血球在體內已被包覆。 因此在這些選項中，最可能 DAT 陽性的是新生兒溶血症。 七、其他溶血相關檢驗（易混淆選項） 檢驗主要用途 Coombs' test（DAT）自體免疫溶血性貧血等免疫性溶血 Ham's test（酸化血清溶血試驗）、糖水試驗陣發性夜間血紅素尿症（PNH） 滲透脆性試驗（RBC 脆性試驗）遺傳性球形紅血球症 Perls' reaction、骨髓鐵染色鐵儲存、鐵粒母細胞 Serum ferritin體內鐵儲存量（缺鐵性貧血） Schilling test維生素 B12 吸收障礙 骨髓檢查造血功能評估，不是自體免疫溶血的首選診斷檢驗 常考陷阱 「DAT 可幫助鑑定血清中多重抗體」：錯。血清抗體篩檢與鑑定（包括多重抗體）要用 IAT 搭配抗體鑑定細胞組；DAT 只看紅血球表面的包覆物。 「G6PD 缺乏、遺傳性球形紅血球症、thalassemia 會 DAT 陽性」：錯。這三者都是非免疫性溶血，DAT 陰性。題目問「最不可能陽性」或「何者會陽性」時，先刪除非免疫性疾病。 Quinidine 引起的溶血 DAT 陰性：錯。這是藥物誘發的免疫性溶血，DAT 可陽性。 TRALI 可用 DAT 協助診斷：錯。TRALI 是肺部中性球與微血管的傷害，DAT 無法協助診斷；近日輸血引起的溶血性輸血反應則可以。 冷凝抗體症候群 anti-IgG 陽性：錯。它是 IgM 固定補體，結果為 anti-IgG（－）、anti-C3d（＋）、多特異性（＋）。三者全陰性或全陽性的選項都不對。 只有補體陽性的 DAT 就判定為溫型，或認為與免疫無關：錯。IgG 陰性、補體陽性表示紅血球上附著補體，不符合典型溫型，而且補體包覆本身就是免疫反應的證據。 「DAT 兩支試管都要加 Coombs control cells」：錯。只有判讀為陰性的試管才加，用來確認陰性結果有效。 多特異性陽性、anti-IgG 陰性時選弱 anti-D 或 Duffy：錯。這兩者是 IgG 抗體，會被 anti-IgG 偵測到；應選會固定補體的 Lewis 與 Kidd。 把 IAT、洗出試驗當成檢測「體內」包覆的方法：IAT 是在試管內致敏；洗出試驗是把抗體釋放出來以鑑定特異性。檢測體內是否已有包覆，答案是 DAT。 anti-E 異體抗體、Weak D、交叉試驗不配合就會 DAT 陽性：錯。這些情況屬於血清抗體或抗原表現的問題，不代表病人紅血球已被包覆。 用 Ham's test、糖水試驗、滲透脆性試驗、Perls' reaction 診斷自體免疫溶血：錯。前兩者用於 PNH，滲透脆性用於遺傳性球形紅血球症，Perls' 為鐵染色。 記憶口訣 DAT 看「球上衣」，IAT 看「血清槍」：DAT 找紅血球在體內已穿上的抗體或補體；IAT 找血清中游離的抗體。 溫型重 IgG，冷型留 C3：溫型自體免疫溶血以 anti-IgG 陽性為主；冷凝抗體症候群因 IgM 回溫脫離，只剩 C3d 陽性。 DAT 陽性三寶「自、輸、新」：自體免疫溶血、溶血性輸血反應、新生兒溶血症；再加上藥物（quinidine）。 「球、蠶、海」DAT 陰：遺傳性球形紅血球症、G6PD 缺乏（蠶豆症）、海洋性貧血都屬非免疫性溶血。 「路基」吃補體：Lewis、Kidd 易固定補體，所以多特異性陽性但 anti-IgG 陰性。 Check cells 只救陰性管：只有陰性的試管才需加入 IgG 致敏細胞做品管。