醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學題庫下載題庫

聚合酶連鎖反應（PCR）的特異性（specificity）是指產生的擴增產物是否只來自目標 DNA 序列。多個因素會影響 PCR 的特異性，以下針對每個選項進行解析。

選項解析：

A. DNA雙股分離（Denaturation）的溫度

• 影響擴增的效率，但對特異性影響有限。

• 若溫度太低，雙股 DNA 無法完全分開，影響產量。

• 若溫度過高，可能導致 DNA 損傷，但與引子專一性的匹配影響較小。

B. 引子延伸（Extension）的溫度

• 影響反應效率，但不是主要影響特異性的因素。

• 延伸溫度（一般為 72°C）決定 DNA 聚合酶作用的最佳效率，但它不會改變引子與模板 DNA 的配對專一性。

C. 引子的序列

• 引子的序列設計是影響特異性的最關鍵因素。

• 設計不當的引子可能與非目標序列配對，造成偽陽性。

• 需避免引子內部形成二級結構（如 primer-dimer）及與其他非目標序列配對。

• 一般建議設計時控制 GC 含量在 40-60%，以增加特異性。

D. 反應循環數

• 影響產物的量，而不是特異性。

• 循環數過多會增加非特異性產物的產生，但這與引子設計的適當性直接相關。

總結：

在 PCR 中，引子的設計與其序列匹配的專一性是決定特異性的最重要因素。若引子序列設計不當，無論其他條件如何調整，都可能導致非特異性產物的產生。

正確答案：C. 引子的序列